hplc色譜柱使用維護(hù)與保養(yǎng)規(guī)程

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1、公司標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)：STD-SOP－EM－033－00題目液相色譜柱使用維護(hù)與保養(yǎng)規(guī)程　　頒發(fā)部門(mén)分析測(cè)試中心制定日期審核日期批準(zhǔn)日期分發(fā)分析測(cè)試中心研發(fā)部目的：建立HPLC色譜柱使用、維護(hù)與保養(yǎng)規(guī)程范圍：HPLC色譜柱職責(zé)：分析測(cè)試中心對(duì)本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)正文：1.色譜柱的構(gòu)造色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲等組成。2.液相色譜柱的使用：色譜柱在使用前，最好進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)

2、試時(shí)是按照色譜柱出廠(chǎng)報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠(chǎng)測(cè)試所使用的條件是最佳條件)，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。2.1樣品的前處理：2.1.1最好使用流動(dòng)相溶解樣品。2.1.2使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。2.1.3使用0.45μm（或0.45μm以下）的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。2.2流動(dòng)相的配制：第8頁(yè)共8頁(yè)液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：2.2.1流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。2.2.2流動(dòng)相具有一定惰

3、性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。2.2.3流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。2.2.4流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，最好使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。2.2.5流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。2.2.6在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。2.3流動(dòng)相流速的選擇：因柱效是柱中流動(dòng)相線(xiàn)性流速的函數(shù)

4、，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。當(dāng)選用最佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)。可采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。注意：2.3.1由于甲醇廉價(jià)，對(duì)于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場(chǎng)合除外)。2.3.2對(duì)于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動(dòng)相，沒(méi)有提純的己烷不得使用。用水最好使用超純水(電阻率大于18

5、兆歐)，去離子水及雙蒸水中含有酚類(lèi)雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果。2.3.3第8頁(yè)共8頁(yè)含水流動(dòng)相最好在實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過(guò)夜。最好加入疊氮化鈉，防止細(xì)菌生長(zhǎng)。2.3.4流動(dòng)相要求使用0.45μm（或0.45μm以下）濾膜過(guò)濾，除去微粒雜質(zhì)。2.3.5使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相，使用合適的流動(dòng)相可延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，提高柱性能。2.4.色譜柱的使用2.4.1一般反相柱使用方法：先以甲醇：水=10：90（V：V）沖洗柱子45分鐘，再換上流動(dòng)相平衡45分鐘，根據(jù)基線(xiàn)情況進(jìn)樣（基線(xiàn)漂移不符合要求時(shí)應(yīng)延長(zhǎng)平衡時(shí)間），分析樣

6、品完畢，流動(dòng)相繼續(xù)20分鐘（或20分鐘以上），再換上甲醇：水=10：90（V：V）沖洗柱子45～60分鐘，然后再用100％甲醇走40分鐘，再放置保存。2.4.2使用緩沖液（或含鹽）作流動(dòng)相，每天實(shí)驗(yàn)完成后，應(yīng)用10倍柱體積的不含且可溶解緩沖鹽的流動(dòng)相（反相柱：如用10％甲醇（V：V））沖洗色譜柱，便色譜柱中的鹽完全洗掉。應(yīng)特別注意：不能用純有機(jī)溶劑直接沖洗色譜柱，以防止鹽析出，堵塞色譜柱或儀器管路，而使色譜柱報(bào)廢。2.4.3一般正相柱使用方法：最常使用的流動(dòng)相是水和乙腈混合物。先以乙腈：水=85：15（V：V）沖洗柱子45分鐘，再換上流動(dòng)相平

7、衡45分鐘，根據(jù)基線(xiàn)情況進(jìn)樣（基線(xiàn)漂移嚴(yán)重應(yīng)延長(zhǎng)平衡時(shí)間），分析樣品完畢，流動(dòng)相繼續(xù)20分鐘（或20分鐘以上），再換上乙腈：水=85：15（V：V）沖洗柱子45～60分鐘，放置保存。2.4.4葡聚糖凝膠柱使用。SephadexG型葡聚糖凝膠只適合在水中使用。用于聚合物的分析檢測(cè)：（流動(dòng)相A一般為磷酸鹽緩沖液；流動(dòng)相B常為水）先以水沖洗柱子60分鐘，根據(jù)基線(xiàn)情況，取對(duì)照溶液適量進(jìn)樣分析，分析完畢，再換上流動(dòng)相A平衡，根據(jù)基線(xiàn)情況進(jìn)樣（基線(xiàn)漂移不符合要求時(shí)應(yīng)延長(zhǎng)平衡時(shí)間），分析樣品完畢，流動(dòng)相繼續(xù)20分鐘（或20分鐘以上），再換水沖洗柱子60分鐘

8、，然后再用5％迭氮化鈉走40分鐘，再放置保存。3.色譜柱的維護(hù)與使用第8頁(yè)共8頁(yè)3.1對(duì)于反相柱,長(zhǎng)期保存保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿(mǎn)乙腈或甲醇（或70％甲醇），柱接頭