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《HPLC色譜柱維護(hù)課件.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、色譜柱的故障診斷與維護(hù)液相色譜柱介紹提綱I.常見問題，現(xiàn)象及排除方案-基線漂移/噪音-峰型-壓力變化-保留漂移II.日常維護(hù)/良好的實(shí)踐-在線裝置-樣品制備-操作的限制III.再生/維修已損壞的色譜柱-物理方法-化學(xué)方法I.常見問題基線噪音可能的原因：流動(dòng)池臟檢測器燈有問題如果是周期性的，則起源于泵的脈沖溫度對(duì)檢測器的影響氣泡經(jīng)過檢測器Time(min.)基線漂移?梯度洗脫?溫度不穩(wěn)定(示差檢測器）?流動(dòng)相中有污染物?柱中的流動(dòng)相沒有平衡?體系中有污染物流出可能的原因：鬼峰鬼峰——即使不樣也會(huì)出現(xiàn)的峰20%-100%MeOH沒有進(jìn)樣6015301503
2、71517問題1-流動(dòng)相臟問題2-樣品過量(也可能是回收率太差)峰型雙峰柱塌陷正常峰雙峰柱中有死體積過濾片部分堵塞只有一個(gè)雙峰——組分的共洗脫可能原因：樣品與溶劑不匹配峰型所有的峰都展寬柱效降低——柱死體積大進(jìn)樣量/質(zhì)量高捻度流動(dòng)相部分峰展寬前次進(jìn)樣后流出的組分大分子量樣品——蛋白或聚合物峰展寬樣品與流動(dòng)相不匹配峰型拖尾峰對(duì)稱性>1.2NormalTailingNormalTailing原因：部分峰拖尾二次保留效應(yīng)——?dú)埩艄璐蓟姆磻?yīng)小峰緊跟在大峰的后面流出柱頭有污染金屬所有峰拖尾額外的柱效應(yīng)柱損壞不適當(dāng)?shù)臉悠妨?溶劑峰型NormalFronting前
3、伸峰不對(duì)稱性<0.9可能的原因柱過載在大峰前，有小峰流出樣品溶劑不適當(dāng)柱死體積過濾片部分堵塞峰型負(fù)峰正常峰負(fù)峰原因樣品的吸收比流動(dòng)相的吸收值低當(dāng)樣品組分通過色譜柱時(shí)打破了原來的平衡用示差檢測器時(shí)是正常的寬峰柱外體積增加*在進(jìn)樣口到柱或柱到檢測器之間，使用細(xì)的短的連接管*保證所有的管路接頭都使用正確*用小體積檢測池*減少進(jìn)樣量柱外體積MinimizeLengthandDiameterofTubingDoNotVolumeOverloadInjectionUseAppropriateVolumeFlowCellE.C.V=Vinj.+Vtubing+Vce
4、llHPLC使用的接頭無死體積接頭不適用的接頭HPLC中使用的柱接頭0.090in.0.130in.0.090in.0.170in.SwagelokWatersParkerRheodyneValcoUptight0.090in.0.080in.TroubleshootingLCFittings,PartII.J.W.DolanandP.Upchurch.LC/GCMagazine6:788(1988)01234567891011柱外體積10μL20μLTime,min.2.1x150mmF=0.2mL/min.柱外體積效應(yīng)的影響(1ul進(jìn)樣)I.不進(jìn)樣
5、時(shí)柱壓連續(xù)升高-泵密封墊-流動(dòng)相有顆粒-流動(dòng)相溶解性-流動(dòng)相的不穩(wěn)定性(聚合)-形成柱死體積(與使用條件有關(guān))II.進(jìn)樣時(shí)壓力升高-樣品有顆粒-樣品在流動(dòng)相中不溶-樣品組分與固定相不兼容壓力I.所有峰都向低保留值方向漂移（酸、堿、中性化合物）-鍵合相流失-流動(dòng)相不穩(wěn)定(可能性較小)-溶劑輸送系統(tǒng)(流速變化)II.所有峰都向高保留值方向漂移-在水/有機(jī)溶劑的混合體系中，有機(jī)溶劑含量減少-柱改變(可能性較小)-溶劑輸送系統(tǒng)(流速變化)III.離子型化合物的色譜峰的保留值漂移-流動(dòng)相中揮發(fā)性組分損失(離子強(qiáng)度,pH漂移)-柱改變(鍵合相或污染)保留值漂移I.
6、與流動(dòng)相有關(guān)的問題-使用新鮮的流動(dòng)相?pH?電導(dǎo)?色譜性能測試II.與色譜柱有關(guān)的問題-測試新柱-用標(biāo)準(zhǔn)的測試混合樣測試新柱-“清洗”色譜柱后再測-考慮樣品基質(zhì)與使用條件對(duì)柱穩(wěn)定性的影響保留值漂移良好的柱使用規(guī)范使用新鮮的水溶液，并考慮使用生物穩(wěn)定劑（如疊氮化鈉）儲(chǔ)存色譜柱時(shí)，應(yīng)沖凈緩沖言，并用有機(jī)溶劑飽和色譜柱（乙腈）避免外力損傷色譜柱：彎曲、跌落或?qū)⒔宇^擰的過緊完全潤濕在運(yùn)輸中變干的色譜柱對(duì)含有保留性較強(qiáng)的雜質(zhì)組分的樣品要進(jìn)行預(yù)處理定期用強(qiáng)極性的溶劑清洗色譜柱清除柱填料的局限性了解溶劑對(duì)樣品的溶解性及分離的影響pH溫度化學(xué)兼容性在使用前過濾溶劑預(yù)柱
7、與保護(hù)柱從泵來的流動(dòng)相預(yù)柱進(jìn)樣器保護(hù)柱分析柱到檢測器預(yù)柱對(duì)流動(dòng)相而言保護(hù)柱對(duì)色譜柱而言StrippingorConcentratingColumnAuthoringDivisionNameFileNameSecurityNotice(ifrequired)H帶可重復(fù)使用接頭及完整保護(hù)柱的卡套柱無保護(hù)柱有保護(hù)柱帶Techtron保護(hù)柱的Zorbax卡套柱帶整體過濾片的Techtron保護(hù)柱min5101520253035mAU140142.5145147.5150152.5155157.5160min5101520253035mAU140142.5145
8、147.5150152.5155157.5160BDSODSHypersil250-2mm有i
