內(nèi)皮祖細(xì)胞鑒定方法.doc

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1、大鼠骨髓EPC的鑒定：①EPC培養(yǎng)約2周后達(dá)到80%～90%融合，以0.25%胰酶+0.01%EDTA消化，傳代至24孔板中，待細(xì)胞貼壁完全后用Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1雙熒光染色鑒定。細(xì)胞在含Dil-ac-LDL(10μg/mL)的培養(yǎng)液中避光孵育10h，然后以2%的中性甲醛固定10min，PBS液漂洗后再加FITC-UEA-1(10μg/mL)避光孵育1h。PBS液漂洗后在熒光顯微鏡下觀察，顯示紅色熒光的為ac-LDL陽(yáng)性細(xì)胞，顯示綠色熒光的為UEA-1陽(yáng)性細(xì)胞，顯示雙熒光陽(yáng)性(黃色)的細(xì)胞被認(rèn)為是EPC，隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)非重疊視野，計(jì)算雙陽(yáng)性細(xì)胞比例。同時(shí)以大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)

2、胞為陽(yáng)性對(duì)照，大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞為陰性對(duì)照。2、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型。取培養(yǎng)14天的EPC細(xì)胞1×10的6次方進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)，分別檢測(cè)CD34+、CD133+、vWF+、Flk-1+細(xì)胞所占的比例。需要一定數(shù)量培養(yǎng)EPC過(guò)程中EPC的顯微鏡下照片