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《bvdv-2 e2基因的原核表達(dá)及重組蛋白反應(yīng)原性的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、第31卷第6期石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)Vo1．31No．62013年12月JournalofShiheziUniversity(NaturalScience)Dec．2O13文章編號(hào)：10077383(2013)06—0680—04BVDV一2E2基因的原核表達(dá)及重組蛋白反應(yīng)原性的研究劉昱成，孟慶玲。，喬軍，王國超，張倩，賀志吳，楊海波，陳創(chuàng)夫(1石河子大學(xué)動(dòng)物遺傳改良與疾病控制新疆自治區(qū)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，石河子832003；2中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州730046)摘要：為了對(duì)BVDV進(jìn)行診斷，根據(jù)GenBank登錄的BVDV-2E2基因序列，
2、設(shè)計(jì)特異性引物，對(duì)BVDV-2新疆分離株SWE2基因進(jìn)行擴(kuò)增，克隆入T載體中測(cè)序，然后亞克隆人BI21(DE3)表達(dá)載體pET-28a中，構(gòu)建重組表達(dá)載體pET-28a-E2，并轉(zhuǎn)化人大腸埃希氏菌中。用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)重組菌，SDS-PAGE和Westernblot分析表達(dá)產(chǎn)物。SDS-PAGE分析證實(shí)表達(dá)的重組融合蛋白相對(duì)分子量為32ku；Westernblot分析表明該重組蛋白可與BVDV-2多克隆抗體發(fā)生特異性血清學(xué)反應(yīng)，證實(shí)表達(dá)的重組E2蛋白具有良好的反應(yīng)原性，為B'vX)V-2診斷試劑研發(fā)奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：BVDV；E2基因；載體構(gòu)建；原核表達(dá)中圖分類號(hào)：$852．65文獻(xiàn)
3、標(biāo)志碼：AProkaryoticExpressionE2geneofBovineViralDiarrheaVirusGenotype2andReacti0n0genicityofRecombinantProteinLIUYucheng，MENGQingling，QIAOJun，WANGGuochao，ZHANGQian，HEZhihao，YANGHaibo，CHENChuangfu(1KeyLaboratoryofAnimalGeneticImprovementandDiseaseControlofXinjiangUygurAutonomousRegion·ShiheziUniver
4、sity，Shihezi832003，China；2KeyLaboratoryofNationalVeterinaryEtiologicalBiology，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，LanzhouVeterinaryResearchInstitute，Lanzhou730046，China)Abstract：AccordingtoBVDV一2E2genesequencesaccessedinGenBank，apairofspecificprimerswasdesignedtoamplifyE2geneofSWisolate．Theamp
5、lifiedproductwasclonedintoTvectorandsequenced．AndthenE2genewassubclonedintoBI21(DE3)expressionvectorpET一28aforexpression．RecombinantplasmidpET一28a—E2wastransformedintoE．coli，AnalysisofSDS-PAGEandWesternblotwereconductedforexpressionproductsafterIPTGinduction．SDSPAGEconfirmedthatthere—combinantf
6、usionproteinwasexpressedwitharelativemolecularweightof32ku．Westernblotanalysisshowedthattherecombinantproteincanspecificallybereactivetoanti—BVDV一2polyclonalantibody，whichconfirmsthattherecombinantE2proteinisendowedwithgoodreactionogenicity．Thestudylaysafoundationfordevelopingdiagnosticreagents
7、forBVDV一2infection．Keywords：Bovineviraldiarrheavirus(BVDV)；E2genes；vectorconstruction；prokaryoticexpression牛病毒性腹瀉／粘膜病(Bovineviraldiarrhea／主要特征的一種傳染病?。BVDV屬黃病毒科(Mucosaldisease，BVD／MD)是由牛病毒性腹瀉病Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)成員，屬內(nèi)還毒(Bo
