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《牛分枝桿菌外膜相關(guān)蛋白的原核表達與反應(yīng)原性鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文牛分枝桿菌外膜相關(guān)蛋白的原核表達與反應(yīng)原性鑒定姓名：鄭新勇申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：黃會嶺；吳清民20120527摘要牛結(jié)核病是由細胞內(nèi)寄生的革蘭氏陽性牛分枝枝桿菌引起的一種人畜共患病，給人類健康和畜牧業(yè)的發(fā)展帶來了巨大危害。世界衛(wèi)生組織(WHO)指出：“在存在牛結(jié)核的國家中，人類始終受到它的威脅，除非著手消滅牛結(jié)核病，否則人類結(jié)核病的控制是不會成功的。"目前，一些較發(fā)達的國家和地區(qū)，如美國、澳大利亞、北歐等已基本消滅了牛結(jié)核病，但由于人結(jié)核病和野生動物結(jié)核病的存在，致使這些國家仍對牛結(jié)核處于不斷的檢疫和高度的警惕之中
2、。在廣大的發(fā)展中國家，該病仍嚴重的流行。但近年來，隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)的發(fā)展和應(yīng)用，牛分枝桿菌基因組序列的不斷增加及許多重要基因功能的闡明，對該菌致病機理和免疫機制等認識不斷加深，這為該病的防治打下了良好的基礎(chǔ)。近年來，牛結(jié)核病診斷方法逐漸得到改善，發(fā)現(xiàn)了很多特異性抗原蛋白編碼基因。傳統(tǒng)細菌學(xué)檢測方法、免疫學(xué)方法和分子生物學(xué)方法相結(jié)合，加速了牛結(jié)核病診斷技術(shù)和產(chǎn)品的研究和開發(fā)。牛分枝桿菌外膜蛋白位于細菌細胞膜的最外層，因其具有免疫原性和免疫保護作用一直備受注目。本研究通過對牛分枝桿菌基因組序列分析，選取其外膜蛋白或胞壁蛋白編碼基因20個，通過信號肽和跨膜結(jié)構(gòu)
3、分析，選定20種膜外蛋白基因，利用Primer5．0分析軟件設(shè)計相應(yīng)引物。將牛結(jié)核分枝桿菌滅活后提取基因組作為模板，通過降落PCR方法擴增目的片段并與原核表達載體PET一32a(+)連接，成功構(gòu)建了13個牛結(jié)核分枝桿菌膜相關(guān)蛋白基因重組表達載體；經(jīng)測序鑒定、誘導(dǎo)表達和SDS—PAGE檢測表明，7種膜蛋白重組載體獲得表達。最后，以結(jié)核病牛臨床陽性動物血清為一抗，經(jīng)Western-blot檢測表明7種膜相關(guān)蛋白都能與結(jié)核臨床陽性病牛血清發(fā)生免疫學(xué)反應(yīng)，表明本研究選擇表達的牛結(jié)核分枝桿菌外膜蛋白或胞壁蛋白在感染動物體內(nèi)具有較強的免疫原性和反應(yīng)原性，有望成為進一步篩選
4、牛結(jié)核病診斷性抗原的候選蛋白，同時這些蛋白的成功表達也成為相關(guān)蛋白功能研究的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：牛分枝桿菌；外膜蛋白；診斷性蛋白；免疫原性ProkaryoticExpressionofMycobacteriumBovisMembrane-associatedProteinsandAntigenicityIdentificationMastercandidate：XinyongZhengAdvisors：Prof．HuilingHuangProf．QingminWuMajor：C1inicalVeterinaryMedicineAbstractBovinetuberc
5、ulosisishighlycontagiOUSzoonosiscausedbymepositiveintracellularbacteriaofMycobacteriumbovis．Asanimportantzoonosis，itisagreatthreattohumanhealthandanimalhusbandry．WHOindicatedthatifacountrywascontaminatedbyBovinetuberculosis，thehumanbeingswillalwaysbethreatenedbythisbacterium．Iftheyd
6、onottakeactionstoeliminateit，thecontrolofhumantuberculosiswillbeunsuccessful．Nowadays，somedevelopedcountriesandregions，suchasUSA，AustraliaandnorthEuropeetc．haveeliminatedBovinetuberculosisinsomeextents，buttheprevalenceofhumanbeingsandwildlifetuberculosismadethesecountriesdetectitall
7、thetime．Butinsomedevelopingcountries，Bovinetuberculosisstillprevailsseverely．Inrecentyears，withthedevelopmentandapplicationofmolecularbiologyandimmunology,wehavemoredeeplyknownaboutthegenesequence．thefunctionofimportantgenes，pathogenicandimmunologicalmechanismofMycobacteriumbovistha
8、nbefore，thisprovide
