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《牛分枝桿菌外膜相關蛋白的原核表達與反應原性鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、河北農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文牛分枝桿菌外膜相關蛋白的原核表達與反應原性鑒定姓名：鄭新勇申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床獸醫(yī)學指導教師：黃會嶺；吳清民20120527摘要牛結核病是由細胞內寄生的革蘭氏陽性牛分枝枝桿菌引起的一種人畜共患病，給人類健康和畜牧業(yè)的發(fā)展帶來了巨大危害。世界衛(wèi)生組織(WHO)指出：“在存在牛結核的國家中，人類始終受到它的威脅，除非著手消滅牛結核病，否則人類結核病的控制是不會成功的。"目前，一些較發(fā)達的國家和地區(qū)，如美國、澳大利亞、北歐等已基本消滅了牛結核病，但由于人結核病和野生動物結核病的存在，致使這些國家仍對牛結核處于不斷的檢疫和高度的警惕之中
2、。在廣大的發(fā)展中國家，該病仍嚴重的流行。但近年來，隨著分子生物學和免疫學的發(fā)展和應用，牛分枝桿菌基因組序列的不斷增加及許多重要基因功能的闡明，對該菌致病機理和免疫機制等認識不斷加深，這為該病的防治打下了良好的基礎。近年來，牛結核病診斷方法逐漸得到改善，發(fā)現(xiàn)了很多特異性抗原蛋白編碼基因。傳統(tǒng)細菌學檢測方法、免疫學方法和分子生物學方法相結合，加速了牛結核病診斷技術和產(chǎn)品的研究和開發(fā)。牛分枝桿菌外膜蛋白位于細菌細胞膜的最外層，因其具有免疫原性和免疫保護作用一直備受注目。本研究通過對牛分枝桿菌基因組序列分析，選取其外膜蛋白或胞壁蛋白編碼基因20個，通過信號肽和跨膜結構
3、分析，選定20種膜外蛋白基因，利用Primer5．0分析軟件設計相應引物。將牛結核分枝桿菌滅活后提取基因組作為模板，通過降落PCR方法擴增目的片段并與原核表達載體PET一32a(+)連接，成功構建了13個牛結核分枝桿菌膜相關蛋白基因重組表達載體；經(jīng)測序鑒定、誘導表達和SDS—PAGE檢測表明，7種膜蛋白重組載體獲得表達。最后，以結核病牛臨床陽性動物血清為一抗，經(jīng)Western-blot檢測表明7種膜相關蛋白都能與結核臨床陽性病牛血清發(fā)生免疫學反應，表明本研究選擇表達的牛結核分枝桿菌外膜蛋白或胞壁蛋白在感染動物體內具有較強的免疫原性和反應原性，有望成為進一步篩選
4、牛結核病診斷性抗原的候選蛋白，同時這些蛋白的成功表達也成為相關蛋白功能研究的基礎。關鍵詞：牛分枝桿菌；外膜蛋白；診斷性蛋白；免疫原性ProkaryoticExpressionofMycobacteriumBovisMembrane-associatedProteinsandAntigenicityIdentificationMastercandidate：XinyongZhengAdvisors：Prof．HuilingHuangProf．QingminWuMajor：C1inicalVeterinaryMedicineAbstractBovinetuberc
5、ulosisishighlycontagiOUSzoonosiscausedbymepositiveintracellularbacteriaofMycobacteriumbovis．Asanimportantzoonosis，itisagreatthreattohumanhealthandanimalhusbandry．WHOindicatedthatifacountrywascontaminatedbyBovinetuberculosis，thehumanbeingswillalwaysbethreatenedbythisbacterium．Iftheyd
6、onottakeactionstoeliminateit，thecontrolofhumantuberculosiswillbeunsuccessful．Nowadays，somedevelopedcountriesandregions，suchasUSA，AustraliaandnorthEuropeetc．haveeliminatedBovinetuberculosisinsomeextents，buttheprevalenceofhumanbeingsandwildlifetuberculosismadethesecountriesdetectitall
7、thetime．Butinsomedevelopingcountries，Bovinetuberculosisstillprevailsseverely．Inrecentyears，withthedevelopmentandapplicationofmolecularbiologyandimmunology,wehavemoredeeplyknownaboutthegenesequence．thefunctionofimportantgenes，pathogenicandimmunologicalmechanismofMycobacteriumbovistha
8、nbefore，thisprovide
