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《枯草芽孢桿菌的培養(yǎng).doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、菌種的培養(yǎng)材料1.1.1菌種枯草芽胞桿菌。1.1.2培養(yǎng)基(1)LB培養(yǎng)基：蛋白月東10g,酵母膏5g,NaCIlOg,蒸懈水1000ml,pH為7,(可溶性淀粉20g)瓊脂20go(2)篩選用培養(yǎng)基：含有2%可溶性淀粉的LB培養(yǎng)基。(3)種子培養(yǎng)基:豆餅粉4%,玉米粉3%,Na2HPO40.8%,(NH4)2SO40.4%,NH4CI0.15%,H2Oo(4)發(fā)酵培養(yǎng)基：豆餅粉5.6%,玉米粉7.2%,Na2HPO40.8%,(NH4)2SO40.4%,NH4CIO.I3%,CaCbO.13%,a—淀粉酶50g。⑵1.13主要試劑蔗糖、葡萄糖、淀粉、玉米淀粉、麥芽
2、糖、酵母浸出物、胰蛋白陳、牛肉貳尿素、氯化錢、硫酸錨、硫酸鎂、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、硫酸亞鐵、氯化鈉和氯化鈣。1.1.4儀器設(shè)備控溫搖床、高壓蒸氣滅菌鍋、電子天平、pH測定儀、無菌操作臺和紫外分光光度計。1.2方法1.2.1培養(yǎng)基的制備⑴稱量按培養(yǎng)基配比依次準確地稱取酵母膏、NaCI、蛋白腺放入燒杯中,并在燒杯中加入少量蒸懈水。注：酵母膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯,也可放在稱量紙上,稱量后直接放入水中,這時如稍微加熱，酵母膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙片⑶。⑵溶化可溶性淀粉溶液的配制方法：將所需克數(shù)的可溶性淀粉放入一個小燒杯中
3、，加入少量蒸懈水，攪拌成糊狀，然后將糊狀溶液均勻倒入少于培養(yǎng)基總體積的沸水中，一邊攪拌一邊加熱,待其溶化成透明狀后繼續(xù)在電爐上加熱5分即制成可溶性淀粉溶液。如果配制固體培養(yǎng)基時,將已準備好的可溶性淀粉溶液倒入燒杯中,將稱好的瓊脂放入已溶的藥品中，再加熱溶化,補水到所需的總體積。在制備用三角瓶盛固體培養(yǎng)基時，一般也可先將一定量的液體培養(yǎng)基分裝于三角瓶中，然后按2%的量將瓊脂直接分別加入各三角瓶中，不必加熱溶化，而是滅菌和加熱溶化同步進行，節(jié)省時間⑷。在瓊脂溶化過程中，應(yīng)控制火力，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器。同時,需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦。配制培養(yǎng)基時,不能用銅或鐵
4、鍋加熱溶化,以免離子進入培養(yǎng)基中,影響細菌生長。⑶調(diào)pH培養(yǎng)基配好以后,先用精密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH,如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加Imol/LNaOH,邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH,直到pH達7為止；反之，用lmol/LHCI進行調(diào)節(jié)。對于有些要求pH較精細的微生物，其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計進行⑸。注意：pH不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度，配制pH低的瓊脂培養(yǎng)基時，若預(yù)先調(diào)好pH并在高壓蒸汽下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固，因此應(yīng)將培養(yǎng)基的成分和瓊脂分開滅菌后再混合z或在中性pH條件下滅菌z再調(diào)整pHo(4)分裝按照實驗要求,可將配置
5、的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角瓶中。液體分裝：分裝的高度以試管高度的1/4左右為宜;分裝三角瓶的量則根據(jù)需要而定,一般以不超過三角瓶的一半為宜。固體分裝：分裝于試管中的應(yīng)不超過試管的1/5,滅菌后制成斜面；分裝三角瓶的量以不超過一半為宜。⑸加塞培養(yǎng)基分裝完畢后z在試管口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染,并保證有良好的通氣性能。⑹包扎加塞后,將全部試管用麻繩捆好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，外邊再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱，組別，配制日期。三角瓶加塞后，夕卜包牛皮紙，用麻繩以活結(jié)扎好，使用時容易解開，同樣注明。(7)滅
6、菌將配置好且包扎完畢的固體、液體培養(yǎng)基及本實驗涉及的試管、三角瓶等及400ml純水于高壓滅菌器中以0.14Mpa,121°C條件下高壓蒸汽滅菌20分鐘。⑻斜面擱置將培養(yǎng)基冷卻至5(TC左右時放置斜面，斜面在試管的1/2處為宜，待斜面凝固后，放置于冰箱中待用。1.2.2菌種的篩選與保藏⑴倒平板將實驗配制好的培養(yǎng)基加熱溶化，待冷卻至55-60°C時，倒平板9皿⑹。⑵稀釋用接種環(huán)取菌種，放入盛90ml無菌水的三角瓶中，振搖。用一支lml無菌吸管吸取lml菌液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，然后用無菌吸管從此試管中吸取lml加入另一盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻
7、，以此類推制成1010-2.1010
