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《地高辛隨機(jī)引物法標(biāo)記探針的southern雜交技術(shù)優(yōu)化》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào),2009,11(4):123-128JournalofAgriculturalScienceandTechnology地高辛隨機(jī)引物法標(biāo)記探針的Southern雜交技術(shù)優(yōu)化1,21121周長(zhǎng)發(fā),張銳,張曉,羅淑萍,郭三堆(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所,農(nóng)作物基因資源與基因改良國(guó)家重大科學(xué)工程,北京100081;2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院,烏魯木齊830052)摘要:為檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉中的BtCry1A基因的表達(dá),采用地高辛隨機(jī)引物法標(biāo)記探針、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的Southern雜交技術(shù),通過(guò)純
2、化探針、使用最適探針濃度、優(yōu)化真空轉(zhuǎn)印、雜交及免疫檢測(cè)方法等一系列優(yōu)化過(guò)程,最終得到背景低、信號(hào)強(qiáng)的Southern雜交結(jié)果。關(guān)鍵詞:地高辛;化學(xué)發(fā)光法檢測(cè);轉(zhuǎn)基因作物中圖分類號(hào):Q781文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):100820864(2009)0420123206TechnologicalImprovementofSouthernBlotUsingDigoxigenin2labeledProbeswithRandom2primedMethod1,21221ZHOUZhang2fa,ZHANGRui,ZHAN
3、GXiao,LUOShu2ping,GUOSan2dui(1.BiotechnologyResearchInstitute,NationalKeyFacilityofCropGeneResourcesandGeneticImprovement,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100081;2.XinjiangAgriculturalUniversity,CollegeofAgriculture,Urumqi830052,China)Abstract:
4、Southernblotusingdigoxigenin(DIG)2labeledprobeswithrandom2primedmethodandchemiluminescentdetectionwasusedtodetectBtCry1Ageneoftransgenicinsect2resistantcotton.AserialofprocedurewasmodifiedbypurifyingtheDIG2labeledprobes,usingoptimumprobesconcentration,imp
5、rovingtheprocessofvacuumtransferring,hybridizationandimmunoassay.Finally,weachievedgoodSouthernblotresultwithlowbackgroundandhighsensi2tivity.Keywords:digoxigenin;chemiluminescentdetection;transgenicplant[4,5][6,7][8]Southern雜交是分析基因結(jié)構(gòu)或檢測(cè)DNA用在轉(zhuǎn)基因植物、動(dòng)物及分子標(biāo)記
6、等研中是否含有特定序列的有效技術(shù)之一,1975年由究方面。[1]SouthernEM首創(chuàng),取其姓氏而命名。該方法因?yàn)橥庠椿蛟谵D(zhuǎn)基因植物基因組中的排布是對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定的經(jīng)典方形式和載體骨架的整合方式與外源基因的遺傳穩(wěn)法,可在DNA水平上檢測(cè)外源基因是否轉(zhuǎn)入并整定性和生物安全性密切相關(guān),而Southern雜交能合到植物染色體上。Southern雜交中探針有同位夠分析T2DNA和載體骨架的不同區(qū)段在轉(zhuǎn)基因素標(biāo)記或非同位素標(biāo)記,其中非同位素標(biāo)記系統(tǒng)生物基因組中的整合與排列方式,以及多拷貝外主要有
7、地高辛標(biāo)記系統(tǒng)和生物素標(biāo)記系統(tǒng)。地高源基因在轉(zhuǎn)基因生物基因組的整合及遺傳行[9]辛標(biāo)記系統(tǒng)與生物素標(biāo)記系統(tǒng)相比,地高辛一般為,所以我國(guó)從轉(zhuǎn)基因生物的安全出發(fā),要求不存在生物體中,因而消除了內(nèi)源性背景。隨著轉(zhuǎn)基因生物安全性評(píng)價(jià)報(bào)告中要包括外源基因的化學(xué)發(fā)光底物的運(yùn)用與不斷的改進(jìn),地高辛標(biāo)記Southern雜交結(jié)果。但Southern雜交步驟繁瑣,系統(tǒng)靈敏度不斷增強(qiáng),甚至超過(guò)放射性同位素標(biāo)許多適宜國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室的細(xì)節(jié)、注意事項(xiàng)并未在地[2,3]記系統(tǒng),因而大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室已將此項(xiàng)技術(shù)運(yùn)高辛標(biāo)記探針的Southern雜
8、交試劑盒說(shuō)明書(shū)中詳收稿日期:2009204229;修回日期:2009206230基金項(xiàng)目:國(guó)家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育科技重大專項(xiàng)(2008ZX080052004)資助。作者簡(jiǎn)介:周長(zhǎng)發(fā),碩士研究生,主要研究方向?yàn)橹参锘蚬こ?。E2mail:zhou.chang.fa@163.com。通訊作者:郭三堆,研究員,主要從事棉花基因工程研究。E2mail:gsdui@mail.caas.net.cn124中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)11卷細(xì)闡述,致
