大豆凝集素提取工藝研究-論文.pdf

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1、2013年第3期牡丹江師范學院學報(自然科學版)NO．3，2O13(總第84期)JournalofMuda~iangNormalUniversityTotalNO84大豆凝集素提取工藝研究李楊(綏化學院食品與制藥工程學院，黑龍江綏化152006)摘要：以大豆為原料，對大豆植物凝集素提取工藝條件進行研究，正交試驗優(yōu)化出的最佳提取工藝條件為：超聲功率400w，超聲時間40min，硫酸銨飽和度為6O，pH值為5．5．關鍵詞：大豆凝集素；提??；凝集效果[中圖分類號]069[文獻標志碼]A[文章編號]1003—6180(2013)03—0028—03大豆凝集

2、素(SBA)口是抗營養(yǎng)因子之一，廣心混勻后置4℃冰箱保存?zhèn)溆茫捍嬖谟诙箍浦参镏?，是一種非免疫原，能凝集細第三步，血凝效果測定．取用Alsevers液保胞或沉淀含糖高分子蛋白質或糖蛋白．SBA含量存的新鮮O型血5mL，加入0．85氯化鈉溶液是評價飼料品質的重要指標．SBA約占大豆蛋白8mL，緩慢混勻，1000r／min離心5min，棄去上質總量的10，采食過量時動物表現為增重減清液，如此重復操作洗滌3～5次，上清液顏色近少，飼料利用率下降，影響免疫系統(tǒng)功能．[2本實乎透明，離心出的紅細胞配成1O的紅細胞懸驗對大豆植物凝集素提取工藝條件進行研究，以液

3、，4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫笇a實踐．第四步，采用試管法觀察凝集反應．將上述已1材料與方法經過恒重處理的試管輕輕混勻，37℃下培養(yǎng)1．5h，肉眼觀察血凝程度．然后以2000r／min1．1材料與試劑離心，棄去上清液，將裝有血凝細胞的試管置于恒材料大豆，綏化市慶安縣生產；新鮮人血(0溫干燥箱中，105℃下干燥至恒重，冷卻、稱重，得型)，采于綏化市第一醫(yī)院．干質量，以其多少評價血凝程度的高低L5]試劑凝集素標準品，Signa公司生產；自配大豆凝集素提取工藝單因素試驗選取超聲Alsevers液，紅細胞懸浮液；試劑均為分析純．時間、超聲功率、硫酸銨飽和度、p

4、H值四個因素1．2儀器與設備進行單因素試驗．按表1條件試驗，A代表超聲KQ一500VDE型雙頻數控超聲波清洗器(昆功率，B代表超聲時間，C代表硫酸銨飽和度，D山市超聲儀器有限公司)；TDL80-2B離心機(上代表PH值(以下同)．海安亭科學儀器廠)；電熱恒溫鼓風干燥箱DHG表1單因素及水平匯總表一9123A(上海恒科學儀器有限公司)；透析袋(組別A／wB／minC／D美國UninaCarbid公司)．20030250401．3實驗方法30050SBA的提取將大豆粉碎均勻后，按一定的35O60料液比加入提取劑，經超聲波處理，離心10min，40070

5、4508O取上清液保存于4℃冰箱中，備用．血凝效果測定第一步，制備Alsevers液．取葡萄糖2．O5g，檸檬酸鈉0．89g，檸檬酸0．05g，氯正交實驗確定提取工藝最佳條件根據單因化鈉0．42g，蒸餾水i00mL，調pH值至7．2．過素實驗的結果，選取對大豆凝集素提取效果有影濾，高壓滅菌10min，置4℃冰箱保存?zhèn)溆茫懙囊蛩厮?，以血凝干重值為評價指標，用正交第二步，制備紅細胞懸浮液．取新鮮O型人設計法進行實驗，工藝流程同提取純化單因素試血5mL，轉移至盛有20mLAlsevers液瓶中，小驗工藝流程，得出血凝效果的最佳提取條件．收稿日期：20

6、13-02—12·28·2013年第3期牡丹江師范學院學報(自然科學版)No．3，2O13(總第84期)JournalofMuda~iangNormatUniversityTotalNO842結果與分析1盈{2．1單因素試驗結果園馨超聲功率對提取效果有影響，不同功率與血焉}凝集細胞團干重的關系見圖1．選取超聲功率300崮W，350W，400W，450W四個水平做正交實驗．涮pH值暖圖4pH與干重的關系霉器捌《2．2正交試驗結果薅以血凝反應凝血干重值為考察指標進行正交實驗．結果見表2．2uU250j刪350400450表2LI6(45)正交實驗結果超

7、聲功率／W圖1超聲功率與干重的關系超聲時間對提取效果有影響，超聲時間和血凝集細胞團干重的關系見圖2．選取20rain，30rain，40rain，50rain四個水平做正交實驗．n0060．0050．004罌0．003暴媒0．002譽noo1OlU2UjU40，U60超聲時間／mha圖2超聲時間與干重的關系硫酸銨飽和度對提取效果有影響，硫酸銨飽和度和血凝集細胞團干重的關系見圖3．由圖3可知，隨著硫酸銨飽和度的增加，凝集素的溶解度逐漸減少，斥出的沉淀的位置逐漸上升．選取硫酸銨飽和度50，60，70，80四個水平做正交實驗．惻蔑禽暴表2的數據表明，各因

8、素對實驗結果影響的魯大小順序為因素順序為A>C3>D>B，即超聲功3040，U6070U率>硫酸銨飽和度>pH值>超聲時間