刀豆蛋白A誘導(dǎo)小鼠肝纖維化動(dòng)物模型的建立及機(jī)制探討-論文.pdf

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1、·258·ChineseHepatology，Apr．2012，Vo1．17，No．4·臨床與基礎(chǔ)研究·刀豆蛋白A誘導(dǎo)小鼠肝纖維化動(dòng)物模型的建立及機(jī)制探討陳麗譚友文葉云孫莉【摘要】目的利用刀豆蛋白A建立昆明小鼠的肝纖維化模型并探討其機(jī)制。方法昆明小鼠210只，隨機(jī)分為7組，正常對(duì)照A組，用刀豆蛋白A10mg每周1～3次(分別為B、C、D組)15mg每周1～2次(分別為E、F組)、20mg每周1次(G組)的不同劑量和不同注射次數(shù)，采用尾靜脈注射方法攻擊昆明小鼠，分別在第1周、第5周、第12周和第20周處死3只小鼠，留取肝組織標(biāo)本行蘇木素一伊紅染色、Mas

2、son纖維染色，并行KnodellHAI和Ishak肝纖維化半定量計(jì)分，最后一次留取血清標(biāo)本，檢測(cè)IL-18、TNF-a和IFN一7。結(jié)果刀豆蛋白A15mg每周1次，10mg每周2次組提示實(shí)驗(yàn)早期肝組織以壞死為主；實(shí)驗(yàn)中期(5～12周)壞死減輕，細(xì)小纖維條索出現(xiàn)；實(shí)驗(yàn)晚期(20周)纖維間隔逐漸增寬。10mg每周1次組實(shí)驗(yàn)晚期(20周)纖維條索形成，纖維間隔有增寬趨勢(shì)。10mg每周3次組和20mg每周1次組全部死亡前，未發(fā)現(xiàn)有明顯的肝纖維化形成。肝組織炎癥活動(dòng)度半定量計(jì)分顯示刀豆蛋白A注射次數(shù)和注射劑量較大組評(píng)分較高(P<0．05)。肝纖維化半定量計(jì)分顯

3、示10mg每周2次組較15mg每周1次、10mg每周1次組高(P

4、g組每周1次為G組扎和注射動(dòng)物血清等方法造成_1。]。但這些模型并不適30只。采用尾靜脈穿刺注射刀豆蛋白，共20周。正用于人類肝纖維化的模型要求，因其形成均未涉及到免常對(duì)照組注射等量生理鹽水。每組分別于第1、5、12疫病理損傷或免疫損傷過程與人類相差甚遠(yuǎn)。近年來，和20周末注射后24h，每次隨機(jī)選取3只小鼠，眼眶有人發(fā)現(xiàn)刀豆蛋白A(ConA)可以造成肝細(xì)胞損傷J，采血法留取血清并處死小鼠，取出肝組織，一部分用且證實(shí)這種損傷的機(jī)制是T細(xì)胞介導(dǎo)的，與人類病毒10甲醛溶液固定，用于HE染色和Masson染色。四、肝組織染色性肝炎的免疫病理機(jī)制非常相似。又有學(xué)

5、者利用ConA成功建立了肝纖維化模型L5]。本研究在昆明小鼠成功采用蘇木素一伊紅染色、Masson纖維染色常規(guī)方法進(jìn)行。建立肝纖維化模型，并對(duì)其發(fā)病機(jī)制進(jìn)行探討。五、小鼠血清TNF—a、IFN一、IL一18ELISA檢測(cè)材料與方法參照有關(guān)說明進(jìn)行。六、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用SPSS12．0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)昆明小鼠210只，6～8周齡，體質(zhì)量18～22g，組間比較采用方差分析。購自蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。所有小鼠飼養(yǎng)于蘇州大學(xué)動(dòng)物房，22℃，55相對(duì)濕度，12h晝夜節(jié)律，自結(jié)果由進(jìn)食、飲水。適應(yīng)環(huán)境1周后開始實(shí)驗(yàn)。一、各組一般情況及死亡數(shù)觀

6、察二、主要試劑正常對(duì)照組完成實(shí)驗(yàn)小鼠無死亡，發(fā)育良好，活ConA，小鼠IL一18、TNF—a、IFN一ELISA檢i貝0試潑好動(dòng)。10mg每周1、2次組，15mg每周1次組完劑盒均為Sigma公司產(chǎn)品。成實(shí)驗(yàn)，死亡率分別為7／18(38．9)，14／18三、動(dòng)物分組(77．8)，11／18(61．1)；10mg每周3次組在實(shí)驗(yàn)昆明小鼠隨機(jī)分為7組，正常對(duì)照組A組30只；中期全部死亡，15mg每周2次和20mg每周1次組10mg組，又分每周1次B組30只；每周2次c組30基金項(xiàng)目：江蘇鎮(zhèn)江市社會(huì)發(fā)展項(xiàng)目(2006047)作者單位：212000江蘇鎮(zhèn)江市第

7、三人民醫(yī)院肝炎科通信作者：譚友文，Email：tyw915@sina．comChineseHepatology，Apr．2012，Vo1．17，No．4·260·表1各組小鼠KnodellHAI計(jì)分注：與正常組比較，q值12．87～138．28，P

8、fanumericalscoringsystemforassessinghistolgical