熊果酸對(duì)急性肝損傷動(dòng)物模型作用的研究.pdf

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1、福建醫(yī)藥雜志2014年8月第36卷第4期FujianMedJ，August2014，Vo1．36，No．4·63··實(shí)驗(yàn)研究·熊果酸對(duì)急性肝損傷動(dòng)物模型作用的研究福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院(福州350101)林艷芹鄭薇黃鶴光【摘要】目的研究熊果酸對(duì)肝損傷的保護(hù)作用，探討其作用機(jī)制。方法采用四氯化碳(CC1)灌胃法建立小鼠肝損傷模型，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT、AST，RT—PCR檢測(cè)小鼠肝臟中孕烷x受體(PXR)、轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子B(TGFB)和腫瘤壞死因子d(TNFa)基因表達(dá)量變化。結(jié)果熊果酸組(10、20、40mg／mL)能有效地降低血清ALT、AST水平，降低肝臟中TNFa的

2、表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

3、具有鎮(zhèn)靜、消炎、抗菌、抗糖尿1．2．1模型建立及分組給藥：昆明小鼠25只，雄病、降血糖等多種生物學(xué)效應(yīng)l_2]。熊果酸具有明顯性，清潔級(jí)，體質(zhì)量(20．0±3．0)g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生的趨脂和抗纖維化作用，并能保護(hù)肝細(xì)胞膜及細(xì)胞產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(閩)2010—0001，質(zhì)量合格證號(hào)器的生物膜系統(tǒng)，使主動(dòng)運(yùn)輸功能恢復(fù)正常，促進(jìn)0000419，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為5組，即肝小葉中央?yún)^(qū)壞死肝細(xì)胞修復(fù)。筆者通過(guò)建立四氯空白組、模型組、熊果酸低劑量組(10mg／mL)、化碳(CC1)灌胃誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型，觀熊果酸中劑量組(20mg／mL)、熊果酸高劑量組察熊果酸是否可以通過(guò)激活孕

4、烷X受體(PXR)的(40mg／mI)。藥物均以花生油溶解。建立四氯化表達(dá)，而起到抵抗肝臟纖維化損傷的作用。碳(CC1)灌胃誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型，模型1材料與方法組、熊果酸組均灌胃給藥，空白組不進(jìn)行任何處1．1材料：1)試劑：熊果酸(南京替斯艾么中藥理。前兩周，各組均隔天CC1灌胃1次。后兩周，研究院)；ALT、AST檢測(cè)試劑盒(上海復(fù)星長(zhǎng)各組均隔天熊果酸灌胃1次。末次灌胃后，小鼠禁征)；瓊脂糖(上海生工)；PCR即用擴(kuò)增試劑盒食24h。(上海生工)；DNAMarkerD(上海生工)；Trizol1．2．2樣本采集：小鼠眼眶取血，放入1．5mL的(Invitrogen公司)；

5、4多聚甲醛(SOLARBIO)；Eppendor{管中，在4℃條件下1000rpm離心15RNA樣品保存液(TIANGEN)；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒min，分離上層血清。取上清于一2o℃冰箱保存；(TAKARA)；BioReadyrTaq(BioFlux)；dNTP肝臟取下后迅速稱重，隨后將小鼠的肝臟迅速泡人(上海生工)；焦炭酸乙二酯(DEPC)(鼎新恒信科含有0．5mL的RNAStore儲(chǔ)存液的離心管中，立技有限公司)。2)儀器設(shè)備：冷凍離心機(jī)即放人一80℃冰箱，用于接下來(lái)的肝臟總RNA(Z323K，德國(guó))；微電腦控制振蕩培養(yǎng)箱(LRH一提取。250一zII，廣東省醫(yī)療器械廠)；全自動(dòng)凝

6、膠成像分1．2．3生化指標(biāo)檢測(cè)：全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血析系統(tǒng)(JS一380A型，上海培清科技有限公司)；清中ALT、AST。全自動(dòng)生化分析儀(邁瑞B(yǎng)S200，中國(guó)邁瑞公司)；1．2．4基因表達(dá)的檢測(cè)：1)總RNA的提?。河秒娪緝x(DYY一6C型，北京市六一儀器廠)；可見(jiàn)TRIZOL法提取肝臟的總RNA，并取1LRNA，光分光光度計(jì)(SpectrumSP1105，上海光譜科技用分光光度計(jì)ND-1000檢測(cè)RNA濃度。2)第一有限公司)；水平凈化操作臺(tái)(SP—DJ，上海浦東物鏈cDNA的合成：采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(TAKA一1福建省腫瘤醫(yī)院藥劑科；2通信作者，福建醫(yī)科大學(xué)協(xié)和l臨床醫(yī)學(xué)院

7、·64·福建醫(yī)藥雜志2014年8月第36卷第4期FujianMedJ，August2014，Vo1．36，No．4RA)，將小鼠肝臟總RNA反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cD—表2兩組ALT、AST檢測(cè)結(jié)果比較[IU／L，i士s]NA。反應(yīng)條件為：37℃，15min；85℃，5S；一2O℃保存?zhèn)溆谩?)目的基因編碼區(qū)的PCR擴(kuò)增：分別設(shè)計(jì)作為內(nèi)參照的肌動(dòng)蛋白(p—actin)，孕烷X受體PXR，腫瘤壞死因子aTNF—a和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子pTGF—p上游引物及下游引物，以第一鏈cD—NA為模板進(jìn)行P