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1、第36卷第1期中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)Vo1.36.NO.12014年1月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJan.20l4doi:10.3969~.issn.1008-0589.2014.01.09CSFV和PRRSV多重RT—PCR檢測(cè)方法的建立曲哲會(huì),郭曉秋,劉濤(信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系,河南信陽(yáng)464000)摘要:為建立同時(shí)檢測(cè)豬瘟病毒(CSFV)和豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)經(jīng)典株和高致病性株fHP.PRRSV1的多重RT.PCR檢測(cè)方法,本研究根據(jù)GenBank中登錄的PRRSV經(jīng)典株、HP—PRRSV株和CSFV基因
2、組全序列,分別設(shè)計(jì)了2對(duì)特異性引物PRRSV.S/PRRSV.A和CSFV.S/CSFV-A,產(chǎn)物分別為544bp、457bp和294bp檢測(cè)結(jié)果顯示,該方法具有高特異性,均可檢測(cè)到1TCID50的病毒量。對(duì)65份臨床上疑似為CSFV和PRRSV感染的病料樣品進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果表明,本研究建立的多重RT.PCR檢測(cè)方法可以用于臨床上CSFV和PRRSV感染引起的傳染病病原學(xué)的檢測(cè),并且能夠準(zhǔn)確鑒別PRRSV經(jīng)典株及HP-PRRSV。關(guān)鍵詞:豬瘟;豬繁殖與呼吸綜合征;多重RT—PCR中圖分類號(hào):$852.65文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1008—0589(2014)01-0034·04Thed
3、evelopmentofmultiplexRT—PCRfordetectionsofCSFVandPRRS;VQUZhe—hui,GUOXiao-qiu,LIUTao(DepartmentofAnimalScience,XinyangCollegeofAgriculturalandForestry,Xinyang464000,China)Abstract:Toestablishtheassayfordetectionsofclassicalswinefevervirus(CSFV)andporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus(PR
4、RSV),aswellasdistinguishingtheconventionalPRRSVandthehighlypathogenicPRRSV(HP—pmp,sv),themultiplexRT-PCRwasdevelopedwithtwopairspecificprimersofPRRSV-S/PRRSV·-AandCSFV-S/CSFV-AdesignedforHP-PRRSV,conventionalPRRSVandCSFVbasedonthesequencesinGenBank.TheresultsshowedthattheassaywasabletodetectCSF
5、V,HP-PRRSVandconventionalPRRSVsimultaneouslybyamplifyingDNAfragmentsof294bp,457bpand547bp,respectively,andthesensitivityoftheassaywasupto1TCID50foreachvirus.Moreover,atotalof65clinicalsamplestestedbythemultiplexRT—PCR,andtheresultsweresimilartothedetectionsbycommercialdetectionkitswhichthecoinc
6、idenceratewas96.92%.Therefore,themultiplexRT—PCRassaycouldbeusedfordetectionofCSFVorPRRSVininfectedpigs.Keywords:classicalswinefever;porcinereproductiveandrespirationsyndrome;multiplexRT—PCR豬瘟(Classicalswinefever,CSF)是由CSF病毒syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起主要(CSFV)~I起的一種急性、高度接觸性傳染病,以稽以母豬出現(xiàn)繁殖障礙和仔豬
7、呼吸障礙為主要特征的留高熱、出血和高死亡率為主要特征_l_。豬繁殖與傳染病[2J。二者均為目前規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)的多發(fā)病,呼吸綜合征(Porcinereproductiveandrespiration并且極易繼發(fā)其他病原感染,加劇病癥,死亡率升*Correspondingauthor收稿日期:2013.04.04基金項(xiàng)目:信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等專科學(xué)校青年教師科研基金項(xiàng)目(2009ZRKX016)作者簡(jiǎn)介:曲哲會(huì)(1980.),男,黑龍江雞西人,講師,主要從事動(dòng)物傳染病學(xué)