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《昆津病毒和巴馬哈森林病毒雙重RT—PCR檢測(cè)方法的建立-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、JOURNAL0FINSPECTIONANDQUARANTINE檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊Vo1．24No．42014年第4期昆津病毒和巴馬哈森林病毒雙重RT—PCR檢測(cè)方法的建立林二妹，白紅巖孫肖紅徐寶梁(1．河北省承德醫(yī)學(xué)院河北承德067000；2中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院)摘要[目的】建立昆津病毒和巴馬哈森林病毒雙重RT-PCR檢測(cè)方法。[方法]利用BeaconDesigner7．0軟件設(shè)計(jì)引物，以人工合成昆津病毒巴馬哈森林病毒E基因的片段作為模板，驗(yàn)證該方法的靈敏度及特異性。[結(jié)果]最低檢出限：昆津病毒1．83×10copies／12L，巴馬哈森林病毒2．02×10copie
2、s／uL。[結(jié)論]建立的昆津病毒和巴馬哈森林病毒雙重RT-PCR檢測(cè)方法具有靈敏度高、特異性好等特點(diǎn)，適合于昆津病毒和巴馬哈森林病毒的快速檢測(cè)。關(guān)鍵詞昆津病毒；巴馬哈森林病毒：RT-PCR中圖分類號(hào)Q939．4EstablishmentofDuplexPCRofKunjinVirusandBarmahForestVirusLinErmei’，BaiHongyan，SunXiaohong，XuBaoliang。(1．ChengdeMedicalCollegeofHebeiProvince，Chengde，Hebei，067000；2．ChineseAcademyofI
3、nspectionandQuarantine)Abstract：AduplexRT-PCRmethodfordetectionofKunjinvirus(KUNV)andBarmahForestvirus(BFV)wasestablished．BasedontheEgenesegmentsofKUNVandBFVrespectively,twotwinprimersweredesignedandsynthesized，andtheRT-PCRwasdeveloped．Thespecialtyandthesensitivityweretested．Thedetecti
4、onlimitsoftheKunjinviruswas1．83x10。copies／gL，andthatofBarmahForestvirus，2．02x10。copies／L．ADuplexRT-PCRforKUNVandBFVdetectionwasestablishedandcharacterizedbyhighsensitivityandrapidity．KeyWords：KunjinVims；BarmahForestVirus；RT-PCR1前言游、人員往來(lái)日益頻繁，KUNV、BFV通過(guò)各種昆津病毒(Kuniinvirus，KUNV)是黃病途徑傳人的可能性
5、很大，雖然我國(guó)尚未分離到這毒科黃病毒屬成員，l960年在澳大利亞昆士蘭兩種病毒，但是存在有相關(guān)媒介蚊蟲(chóng)，人群中也北部的環(huán)喙庫(kù)蚊(CulexAnnulirostris)中分離并曾檢測(cè)有BFV抗體，如貴州省健康人群BFVIgG抗以該地區(qū)一個(gè)土著部落名字命名?，其他蚊種如體陽(yáng)性率為1．49％，不明原因發(fā)熱患者中檢出BFV偽雜鱗庫(kù)蚊(Culexpreudovishnui)，致倦庫(kù)蚊、IgM陽(yáng)性率為1．96％J，提示我國(guó)人群可能存在該Cxaustralicus和CxSquamosus等蚊種也曾分離出病毒的感染。目前，針對(duì)KUNV的檢測(cè)方法有血KUNVl2?！俊Ｈ烁腥綤UNV后
6、大多數(shù)無(wú)臨床癥狀，清學(xué)、組織免疫學(xué)檢測(cè)，可作為KUNV病毒病的少數(shù)與一些非腦炎性疾病有關(guān)，伴有發(fā)熱、頭診斷依據(jù)，及分子生物學(xué)檢測(cè)『】叫；針對(duì)BFV的檢測(cè)痛、肌痛和身體不適，有時(shí)還伴有關(guān)節(jié)粘連]。巴方法有IgM抗體和IgG抗體檢測(cè)]，但是能同時(shí)檢馬哈森林病毒(BarmahForestvirus，BFV)屬于測(cè)這兩種病毒的具體方法尚無(wú)報(bào)道。鑒于這兩種甲病毒，首次分離于1974年】，主要傳播媒介是伊病毒均主要分布于澳大利亞，傳播媒介以致倦庫(kù)蚊屬和致倦庫(kù)蚊】。BFV感染可出現(xiàn)發(fā)熱、頭痛及蚊為主，建立能同時(shí)檢測(cè)這兩種病毒的雙重RT．肌肉和關(guān)節(jié)疼痛等癥狀，有時(shí)出疹，通常是在身P
7、CR方法，能有效作為口岸傳染病監(jiān)測(cè)的技術(shù)儲(chǔ)軀或四肢上削。備。隨著中國(guó)與世界其他國(guó)家之間的貿(mào)易、旅2材料與方法項(xiàng)目基金：國(guó)家質(zhì)檢總局公益項(xiàng)目(201210014)通訊作者E-mail：xubl@caiq．gov．ca·58·2014年第4期Vo1．24No．4檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊JOURNALOFINSPECTIONANDQtJARANFINE2．1材料及反轉(zhuǎn)錄試劑盒：Promega公司。2．1．1儀器2．2方法生物安全柜：美國(guó)NUAIR；普通PCR儀：美2．2．1引物設(shè)計(jì)國(guó)ABI2720；超微量分光光度計(jì)：美國(guó)NanoDrop從GenBank中檢索KUNV病毒34株，B
