產(chǎn)氣莢膜梭菌PCR分型方法的建立與初步應(yīng)用-論文.pdf

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1、2014年第8期趙鳳菊：產(chǎn)氣莢膜梭菌PCR分型方法的建立與初步應(yīng)用9產(chǎn)氣莢膜梭菌PCR分型方法的建立與初步應(yīng)用趙鳳菊，陳瑤，于學(xué)武，關(guān)淼，劉坤洋，李井春，顧貴波，趙鵬(1．遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧省動(dòng)物醫(yī)學(xué)研究院，遼寧沈陽(yáng)1101642．遼寧省北鎮(zhèn)市常興店鎮(zhèn)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧北鎮(zhèn)121306)摘要：為了對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭茵進(jìn)行快速分型，本研究根據(jù)GeIlBank中公布的d一毒素、B一毒素、s一毒素、L一毒素、腸毒素和B2-毒素基因的保守序列設(shè)計(jì)6對(duì)特異性引物，預(yù)期基因片段大小分別為283、102、172、501、422和255bp。結(jié)果表明，設(shè)計(jì)的引

2、物均能擴(kuò)增出目的基因，擴(kuò)增的基因片段大小與預(yù)期的一致，且敏感性高、特異性好。應(yīng)用建立的PCIL檢測(cè)方法對(duì)4份臨床牛病料進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果4份牛病料均為A型產(chǎn)氣莢膜梭茵陽(yáng)性，表明所建立的PCIL方法可用于產(chǎn)氣莢膜梭茵的快速分型。關(guān)鍵詞：產(chǎn)氣莢膜梭茵；PCK；毒素中圖分類號(hào)：$852．61文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1672—9692(2014)08—0009—05EstablishmentandPreIiminaapplicationofPCRtypingforClostridiumperfringensZhaoFengju，ChenYao，YuXuewu，Gua

3、nMiao，LiuKunyang，Li．Iingchun，GuGuiboH，ZhaoPeng。(1．PreventionandControlCenterofLiaoningProvinceAnimalEpidemicDisease，AnimalMedicineResearchInstituteofLiaoningProvince，LiaoningShenyang110164：2．BeizhenDistrictBureauofanimalhealthandproduction，LiaoningBeizhen121306)Abstract：Inorderto

4、identifyC．perfringenstypesquickly，sixspecificprimersweredesignedforQ—toxin，—toxin，e—toxin、L—toxin、enterotoxinand2-toxinconservedsequences．a(chǎn)ccordingtoconservedsequencepublishedinGenBank．Theexpectedgenefragmentswere283，102，172，501，422and255bp．Theresultsshowedthatthedesignedprimersc

5、ouldamplifythetargetgenes，thegenesfragmentsizewereasexpected．Andthemethodhadhighsensitivityandspecificity．Fourbo—vinesamplesweredetectedbythePCRmethod．Theresultsshowedthatfourclinicalsampleswereal1identifiedastypeAC．perfringens．ThePCRdetectionmethodcanbeusedfortypingofC．per—fring

6、ens．KeywordS：Clostridiumperfringens：PCR：Toxin產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)是一廣泛分布，可見于土壤、污水、飼料、食物、糞便種能形成芽胞的革蘭陽(yáng)性厭氧菌，是人類、家畜和及人和動(dòng)物胃腸道中。本菌主要通過產(chǎn)生毒素導(dǎo)致野生動(dòng)物共患的病原“。在微厭氧環(huán)境下即可生機(jī)體發(fā)病，也可以通過在形成芽胞過程中合成胞內(nèi)長(zhǎng)，但在厭氧條件下生長(zhǎng)繁殖良好。本菌在自然界腸毒素而致病。產(chǎn)氣莢膜梭菌不僅可以導(dǎo)致各種收稿日期：2014—07-11作者簡(jiǎn)介：趙風(fēng)菊(1978一)，女，碩士，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物人畜共

7、患病預(yù)防控制及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)等工作。通訊作者：顧貴波(1971-)，男，碩士，研究員，副主任，主要從事動(dòng)物疫病預(yù)防控制及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)等工作。1O現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)2014年第8期動(dòng)物壞死性腸炎、腸毒血癥，也可導(dǎo)致動(dòng)物突然死1．3引物根據(jù)GenBank上登錄的Q一毒素亡，死亡率可高達(dá)70％100％，危害嚴(yán)重。同時(shí)，(eu605736．1)、B一毒素(HQ179547．1)、￡一毒素本菌還是引起人類食物中毒和創(chuàng)傷性氣性壞疽的主(JX010451．1)、l一毒素(X73562．1)、腸毒素要病原菌之一，病死率高達(dá)40％100％。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)(GQ225719．1)和B2一毒素

8、(HQ853336．1)基因序列，道產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素至少有17種，但個(gè)別菌株只產(chǎn)