甘露聚糖肽 HPLC法指紋圖譜的建立-論文.pdf

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1、動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，35(3)：36—40ProgressinVeterinaryMedicine甘露聚糖肽HPLC法指紋圖譜的建立毛瑞娟，毛跟年，李楠，邵靜可(陜西科技大學(xué)，陜西西安710021)摘要：采用HPIC法建立甘露聚糖肽口服液中氨基酸指紋圖譜。色譜條件為DiamonsilC18柱(250mm×4．6mm，5Mm)，流動(dòng)相：A相為乙腈一水(4：1)，B相為0．1mol／L醋酸鈉一乙腈(93：7，pH6．4)；梯度洗脫；流速1．0mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm。以異硫氰酸苯酯為衍生化試劑，對(duì)來(lái)自3個(gè)廠家共10

2、批次產(chǎn)品進(jìn)行色譜分析，建立甘露聚糖肽口服液指紋圖譜。精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD均不大于3。未水解甘露聚糖肽口服液指紋圖譜共有11個(gè)峰，水解后指紋圖譜共有11個(gè)峰，樣品相似度均在0．90以上。研究結(jié)果表明，本方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確，可為控制甘露聚糖肽口服液的質(zhì)量提供參考。關(guān)鍵詞：甘露聚糖肽口服液；高效液相色譜；衍生化；指紋圖譜中圖分類號(hào)：R914文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1007—5038(2014)03003605甘露聚糖肽又名多抗甲素，是我國(guó)首創(chuàng)的一種(分析純)；甘露聚糖肽口服液：1批次～4批次樣品新型免疫增強(qiáng)劑，是從健康人

3、口腔分離的一株a一溶批號(hào)分別為130105、130116、130117、130108，成都血性鏈球菌(a—hemolyticStreptococcus)33號(hào)菌株利爾藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；5批次～7批次樣品批號(hào)分經(jīng)深層培養(yǎng)、發(fā)酵提取而得到的一種具有免疫活性別為121001、121004、121005，西安交大藥業(yè)有限公和抗腫瘤作用的多糖類物質(zhì)]。甘露聚糖肽具有提司產(chǎn)品；8批次～1O批次樣品批號(hào)分別為121104、高免疫功能、提升白細(xì)胞、抑瘤等作用，主要用于免121105、121107，上海全宇生物科技內(nèi)鄉(xiāng)制藥有限公疫增強(qiáng)劑及抗

4、瘤常規(guī)治療的輔助劑¨2]?，F(xiàn)有文獻(xiàn)司產(chǎn)品。報(bào)道甘露聚糖肽產(chǎn)品的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中只包含性狀、鑒1．1．2主要儀器Waters高效液相色譜儀，包括別、檢查、甘露糖含量測(cè)定項(xiàng)，客觀而言，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)難1525型二元梯度色譜泵、2487型紫外檢測(cè)器、Em—以全面反映產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。power色譜工作站，美國(guó)Waters公司產(chǎn)品；K250DE型超聲波清洗器，江蘇省昆山市超聲儀器有甘露聚糖肽中除了含有大量甘露糖以外，氨基限公司產(chǎn)品；ALC一210．2型電子天平，北京賽多利斯酸也是其主要藥效成分，是反映該產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵儀器系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品；DGG

5、一9070A型電熱恒溫鼓因素。氨基酸指紋圖譜的建立有利于甘露聚糖肽風(fēng)干燥箱，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司產(chǎn)品；PHB一3及成品制劑的質(zhì)量控制。而目前從氨基酸角度對(duì)甘筆式pH計(jì)，上海三信儀表廠產(chǎn)品；SK—l型快速混露聚糖肽口服液進(jìn)行質(zhì)量控制的相關(guān)報(bào)道，其產(chǎn)品勻器，金壇市杰瑞爾電器有限公司產(chǎn)品。來(lái)自同一廠家，不具概括性，且與本研究方法有所差1．2方法異。因此，為了全面地進(jìn)行質(zhì)量控制，本研究采用高1．2．1色譜條件DiamonsilC18色譜柱(250mm效液相衍生化法分析甘露聚糖肽口服液中氨基×4．6mm，5“m)；流動(dòng)相：A相為

6、乙腈一水(4：1)，B酸?，分別對(duì)來(lái)自不同廠家共1O批次水解前后的相為0．1mol／L醋酸鈉一乙腈(93：7，pH6．4)；梯度樣品建立指紋圖譜，可為有效控制甘露聚糖肽口服洗脫程序如下：0～11．0min，A0～7；11．0min液的質(zhì)量提供參考?！?3．9min，A7～12；13．9min～14．0rain，l材料與方法A12～15；l4．0rain29．0min，A15～34；1．1材料29．0min～30．0min，A34～100；30．0min～1．1．1原料與試劑乙腈(色譜純)、超純水；乙酸36．0min，A10

7、0；36．0rain40．0min，A100～鈉、乙酸、異硫氰酸苯酯、三乙胺、正己烷、苯酚、鹽酸0；40．0min～45．0min，A0。流速1．0收稿日期：2O13—1O一27基金項(xiàng)目：陜西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2012JZ3OO2)作者簡(jiǎn)介：毛瑞娟(1988)，女，山西臨汾人，碩士研究生，主要從事生物化工研究。*通訊作者毛瑞娟等：甘露聚糖肽HPLC法指紋圖譜的建立37mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；柱溫25℃。積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3．0，保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)1．2．2衍生化試劑的制備精密量取0．3mL異偏差均小于1．4，表

8、明精密度良好。硫氰酸苯酯置于25mL棕色量瓶中，采用乙腈定容2．1．2重現(xiàn)性試驗(yàn)精密量取同一批次樣品5份，至刻度，搖勻，備用。按1．2．5方法制備成供試液，分別進(jìn)樣1OL記錄1．2．3未水解樣品的制備精密量取甘露聚糖肽色譜圖。未水解供試液色譜圖中各主要色譜峰保留口服液3mL置于25mL容量瓶中，用超純水