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《雞馬立克氏病毒SYBR Green I實時熒光定量PCR檢測方法的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、第31卷第4期四川農(nóng)業(yè)大學學報Vo1．31No．42013年12月JournalofSichuanAgriculturalUniversityDec．2013doi：10．3969／j．issn．1000—2650．2O13．04．013雞馬立克氏病毒SYBRGreenI實時熒光定量PCR檢測方法的建立程洋，馮澤清，楊輝林，劉益平，朱慶(四川農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，四川雅安625014)摘要：【目的】建立一種能夠快速、靈敏地檢測雞馬立克氏病病毒(MDV)的SYBRGreenI實時熒光定量檢測方法?！痉椒ā酷槍?/p>
2、馬立克氏病毒特異的Meq基因序列設(shè)計引物，利用SYBRGreenI染料建立檢測馬立克氏病毒的實時熒光定量PCR方法，進行敏感性、特異性、重復性試驗，并應(yīng)用該方法檢測了羅曼蛋雞、AA肉雞、二郎山山地雞SD02和SD03品系4種雞只感染組和對照組樣本的脾、法氏囊、胸腺等組織中的病毒拷貝數(shù)?！窘Y(jié)果】該方法建立的定量標準曲線熒光閾值循環(huán)數(shù)(Thresholdcycle，Ct)與模板拷貝數(shù)呈良好線性關(guān)系(r一0．996)，擴增效率(E)為96，熔解曲線分析顯示其PCR擴增具有良好的特異性，敏感性和重復性試驗證明該方法
3、具有較高的靈敏度和穩(wěn)定性，最低檢測濃度為10拷貝／L。同時運用該方法對試驗樣本進行檢測，結(jié)果顯示在4個感染組雞只的肝，脾，腎，胸腺，法氏囊組織中均檢測出Meq的拷貝，并計算出了待測樣品的病毒拷貝數(shù)，相反在未感染組卻沒有檢測出任何Meq的拷貝。試驗結(jié)果還發(fā)現(xiàn)二郎山山地雞兩品系各組織中MDV的拷貝數(shù)顯著低于AA肉雞和羅曼蛋雞各組織。【結(jié)論】建立的檢測方法能夠快速檢測馬立克氏病毒，結(jié)果準確，成本低廉，可以將其作為生產(chǎn)上監(jiān)控馬立克氏病的一個重要手段。關(guān)鍵詞：馬立克氏病毒；Meq基因；SYBRGreenI實時熒光定量
4、PCR；檢測中圖分類號：$831．7；$858．31文獻標志碼：A文章編號：10002650(2013)04—0427—06EstablishmentofReal-timeFluorescentQuantitativePCRforDetectingMarek'sDiseaseVirusBasedonSYBRGreenICHKNGYang，F(xiàn)ENGZe—qing，YANGHui—Iin，LIUYi—ping，ZHUQing(CollegeofAnimalScienceandTechnology，Sichuan
5、AgriculturalUniversity，Yaan625014，Sichuan，China)Abstract：【Objective]TodevelopaSYBRGreenIreal—timefluorescentquantitativePCRassayfordetectingMarekSdiseasevirus(MDV)rapidlyandaccurately．【Method]SpecificprimersweredesignedaccordingtotheMeqgeneofMarekSdiseasev
6、irus．ASYBRGreenIreal—timeflu—orescentquantitativePCRassayfordetectingMDVwasestablishedwithitssensitivity，specifici—ty，repeatabilitydetermined．ThenwemeasuredthecopynumberofMarekSdiseasevirusbe—tweentheMDV—infectionchickensandthenormalchickensbyusingthismeth
7、od．[ResultslTheresultsshowedgoodlinearrelationshipbetweenthethresholdCycle(Ct)ofthequantitativestandardcurveandthecopynumberoftemplate(r一0．996)，andtheslopeandtheamplificationefficiency(E)oftheMeqgene(一3．433and96，respectively)．Thedetectionsensitivitywas102c
8、opies／u1．Thistesthadgoodrepetition，samplesweredetectedsuccessfully．ItshowedthatthecopynumberofMDVhadbeendetectedinliver，spleen，kidney，thymusandbursaoffabri—ciousofMDV—infectedchickens．buttherewasnotanyamplifi
