資源描述：
《人TRAIL胞外區(qū)原核可溶性表達(dá)及活性鑒定-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、河南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)2014年5月第33卷第2期117人TRAIL胞外區(qū)原核可溶性表達(dá)及活性鑒定鮑應(yīng)環(huán)，程相樹，劉峰濤(河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞與分子免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室，河南開封475004)摘要：目的獲得具有生物活性的腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)胞外段蛋白。方法根據(jù)大腸桿菌密碼子偏愛性要求，設(shè)計(jì)合成編碼TRAIL胞外段的DNA序列，構(gòu)建成pET3Oa_TRAIL胞內(nèi)融合表達(dá)質(zhì)粒，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主E．coliBL21。在不同溫度、不同濃度的IPTG條件下誘導(dǎo)表達(dá)TRAIL，sDS-PAGE分析表達(dá)產(chǎn)物，MTT法檢測(cè)產(chǎn)物活性。
2、結(jié)果構(gòu)建的工程菌株表達(dá)29KD的可溶性TRAIL融合蛋白，能誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡。結(jié)論成功表達(dá)了人TRAIL胞外段蛋白，為進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：TRAIL；原核表達(dá)；Jurkat細(xì)胞；凋亡中圖分類號(hào)：Q782文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1672—7606(2014)O2一O117一O3ExpressionthetracellulardomainofhumanTRAILandidentificati0n0fitsactivityBAOYinghuan，CHENGXiangshu，LIUFengtao(KeyLaboratoryo
3、fCelluarandMolecularImmunology，Institutionofimmunology，MedicalSchoolofHenanUniversity，Kang，Henan475004，China)Abstract：ObjectiveToobtaintheextracellulardomainoftumornecrosisfactor—relatedapoptosis—inducingligand(TRAII)withactivity．MethodsWedesignedandsynthesizedDNAencod
4、ingtheTRAIIextracellularDNAsequencesaccordingtothecodingpreferenceoftheE．coliandconstructedtheprokaryoticexpressionvector：thepET30aTRAILfusionexpressionplasmid．TherecombinantplasmidwastransformedintotheexpressionhostE．coliBL21toinduceexpressionunderdifferenttemperature
5、conditions，differentconcentrationsofIPTGandalcoho1．AfterinducingexpressionweusedtheSDS-PAGEmethodtOanalysisofexpressionproductandusedtheMTTmethodtoassaytheactivityofexpressionproduct．ResultsTheconstructedengineeringbacteriaexpresseda29KDsolubleTRAILfusionprotein，andthi
6、sproteincaninduceJurkatcellapoptosis．ConclusionWesuccessfulexpresstheextracellulardomainofhumanTRAILproteinwithactivities．Keywords：TRAIL；Prokaryoticexpression；Jurkatcells；Apoptosis；apoptosis腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TNF—re—聚化并起始細(xì)胞凋亡途徑_4]。之前已有多人通過latedapoptosis—inducingligand，TRA
7、IL)是TNF超不同方式構(gòu)建TRAIL的原核表達(dá)載體，并獲得目的家族成員，可選擇性的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞蛋白，但目的蛋白多以包涵體的形式表達(dá)。我們的實(shí)和轉(zhuǎn)化細(xì)胞凋亡而對(duì)正常細(xì)胞無毒口‘3l，因此具有被驗(yàn)根據(jù)大腸桿菌表達(dá)的密碼子偏愛性，優(yōu)化編碼開發(fā)成治療腫瘤的蛋白質(zhì)藥物的可能性。其分子機(jī)TRAIL(114～281氨基酸)的基因，人工合成重組基制是受體DR4或DR5結(jié)合后誘發(fā)TRAIL發(fā)生三因，構(gòu)建在表達(dá)質(zhì)粒pET30a上，直接獲得可溶性收稿Et期：2014—0212基金項(xiàng)目：河南省醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目資助(WKJ2007—021
8、)。作者簡(jiǎn)介：鮑應(yīng)環(huán)(1987一)，女，河南信陽人，碩士研究生，從事抗體工程研究。通訊作者：劉峰濤(1970一)，男，河南開封人，博士，副教授，從事分子免疫的教學(xué)與科研工作。118JournalofHenanUniversity(Me
