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《豬繁殖與呼吸綜合征基因標(biāo)記疫苗株NP49-ELISA鑒別診斷方法的建立-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)2013，21(6)：12-18ChineseJoumalofAnimalInfectiousDiseases·研究論文·豬繁殖與呼吸綜合征基因標(biāo)記疫苗株NP49．ELISA鑒別診斷方法的建立孫晶，周艷君，徐彥召，姜一峰，童武，童光志(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海200241)摘要：豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)rHN4．A25+NP49株是新型基因標(biāo)記弱毒疫苗候選株，為了配合對(duì)該基因標(biāo)記疫苗免疫豬血清抗體的鑒別診斷，本研究以標(biāo)記基因編碼的NP49(新城疫病毒NP
2、蛋白C末端49個(gè)氨基酸，即NP49)多肽作為包被抗原，建立標(biāo)記疫苗免疫豬血清中NP49抗體的ELISA鑒別診斷方法。通過對(duì)NP49一ELISA工作條件的優(yōu)化，結(jié)果顯示NP49一ELISA的多肽抗原最適包被濃度為500ng／孔，被檢血清最佳稀釋度為1：40。利用ROC曲線法確定S／P臨界值為0．2，該方法批內(nèi)與批間重復(fù)試驗(yàn)的變異系數(shù)均小于10％，與幾種常見豬病陽性血清無交叉反應(yīng)，具有較好重復(fù)性和特異性。本研究建立的NP49．ELISA鑒別診斷方法為豬繁殖與呼吸綜合征新型基因標(biāo)記疫苗的臨床應(yīng)用提供了有力保障。關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征標(biāo)記疫苗；多肽抗原；NP49一ELISA；鑒別診斷中圖分
3、類號(hào)：S858．282．659．6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1674—6422(2013)06．0012—07DEVELoPMENToFNP49一ELISAFORDIFFERENTIALDIAGNOSISFoRMARKERVACCINEAGAINSTPoRCINEREPRoDUCTIVEANDRESPIR【1oRYSYNDRoMESUNJing，ZH0UYan-jun，xUYan—zhao，JIANGYi—feng，TONGWu，TONGGuang—zhi(ShanghaiVeterinaryResearchInstitute,CAAs。Shanghai200241。China)Abst
4、ract：RecombinantvirusrHN4一A25+NP49strainisanewlydevelopedgeneticmarkervaccineagainsthighlypathogenicporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus(PRRSV)．ThemarkergeneNP49represents49aminoacidsatCterminalofNewcastlediseasevirusNPprotein．Reasonably,detectionoftheantibodiesspecificformarkergeneNP4
5、9woulddifferentiatevaccinatedpigsfromfieldvirusinfectedpigs．Todevelopadifferentaldiagnosis，synthesizedNP49peptidewasusedascoatingantigeninindirectELISA．Then，thedifferentialNP49一ELISAwasoptimizedforcoatingantigenconcentration，serumdilution，etc．TheoptimalcoatingconcentrationofNP49antigenwas500ng／w
6、ellandoptimalserumdilutionwas1：40．ThecriticalS／Pvaluewasdeterminedat0．2accordingtotheROCcurve．Theintra—andinter-assaycoeficientsofvariabilitybetweenexperimentswerealllessthan10％．Therewasnocrossreactionwithantibodiestootherswineviruses，indicatinggoodreproducibilityandspecificity．Resultshavedemons
7、tratedthatNP49一ELISAisareproducibleandspecificmethodfordiferentialdiagnosisofvaccinatedpigs，pavingapathwayforclinicalapplication收稿日期：2013-10-04基金項(xiàng)目：國(guó)家“863”計(jì)劃項(xiàng)目(2011AAIOA208—2)；國(guó)際合作項(xiàng)目(2010DF33920)；科研院所技術(shù)開發(fā)研究專項(xiàng)資金(2012EG134237)
