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1、·1058·安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2015Aug;50(8)Ghrelin預(yù)處理對H9C2心肌細胞缺氧/復(fù)氧損傷的影響1121陳瑩瑩,吳繼雄,王靚,何非摘要目的探討Ghrelin預(yù)處理對H9C2心肌細胞缺氧/lin是1999年首次從胃組織中發(fā)現(xiàn),由28個氨基酸復(fù)氧損傷的影響。方法培養(yǎng)H9C2心肌細胞并建立心肌組成的腦腸肽,是生長激素促分泌素受體(growth細胞缺氧(21h)/復(fù)氧(6h)模型。細胞隨機分成4組:對照secretagogue
2、receptor,GHSR)的內(nèi)源性配體[2]。組,缺氧/復(fù)氧組(H/R組),缺氧/復(fù)氧+Ghrelin組(H/R+GHSR屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族,以兩種亞型的形G組),缺氧/復(fù)氧+Ghrelin+生長激素促分泌素受體(GH-式存在,即GHS-R1a和GHS-R1b。Ghrelin及其受SR)-siRNA組(H/R+G+G-siRNA組);采用siRNA干擾技體GHSR存在于許多器官和組織中,Ghrelin通過與術(shù)阻斷Ghrelin受體GHSR的表達以及Hoechst33258染色GHSR結(jié)合參與了
3、食欲、能量、體重的調(diào)節(jié),糖和脂劑和流式細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡率,Westernblot法檢測肪的代謝,胃腸、心血管和免疫功能的調(diào)節(jié)以及細胞各組凋亡相關(guān)蛋白表達情況。結(jié)果GHSR存在于正常的增殖和凋亡等諸多生理作用,并且可以通過siR-H9C2心肌細胞中,GHSR-siRNA可以顯著抑制H9C2心肌細胞中GHSR的表達。與H/R組相比,在H/R+G組中缺氧/NA干擾阻斷GHSR的表達,從而影響Ghrelin各項[3-4]復(fù)氧損傷所導(dǎo)致心肌細胞的凋亡率明顯下降(P<0．05),B生理作用的發(fā)揮。Ghre
4、lin及其受體在人的心[5]淋巴細胞瘤-2蛋白/Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2/Bax)比率明臟和血管中都有表達。在心血管系統(tǒng)中,Ghrelin顯上調(diào)(P<0．05),含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3可以增加心肌收縮力,改善由心肌梗死引起的心臟(caspase-3)表達水平被顯著抑制(P<0．05)。而與H/R+G衰竭,并且這種心臟保護作用的發(fā)揮不依賴于生長組相比,H/R+G+G-siRNA組心肌細胞凋亡率增加(P<激素的釋放[6]。該研究利用H9C2心肌細胞株建立0．05),Bcl-2/Bax
5、比率顯著下降(P<0．05),caspase-3表達心肌細胞缺氧/復(fù)氧模型,模擬心肌細胞的缺血再灌上調(diào)(P<0．05)。結(jié)論Ghrelin具有減輕缺氧/復(fù)氧所引起注,同時運用siRNA技術(shù)阻斷GHSR的表達,觀察的心肌細胞損傷、抑制心肌細胞凋亡的作用。各實驗組心肌細胞凋亡率以及凋亡相關(guān)蛋白的表達關(guān)鍵詞H9C2細胞株;缺氧/復(fù)氧損傷;Ghrelin;凋亡情況,研究Ghrelin預(yù)處理對缺氧復(fù)氧心肌細胞的保中圖分類號R322.11;R845.22護作用以及對心肌細胞凋亡的抑制作用,為減少心文獻標志碼A文
6、章編號1000-1492(2015)08-1058-06肌細胞缺血再灌注損傷提供新的思路。臨床上應(yīng)用的溶栓、經(jīng)皮冠狀動脈介入治療以1材料與方法及冠狀動脈搭橋手術(shù)能夠有效治療心肌梗死,再血1.1材料H9C2心肌細胞株(中國科學(xué)院上海生管化治療后引起的心肌缺血再灌注損傷(myocardial命科學(xué)研究所細胞資源中心);Ghrelin(美國Phoe-ischemia-reperfusioninjury,MIRI)嚴重影響患者的預(yù)[1]nixbiotech公司);胰蛋白酶(中國Biosharp公司);后,因
7、此如何降低MIRI現(xiàn)已成為心臟病學(xué)研究DMEM高糖培養(yǎng)基(美國Hyclone公司);DMEM低的重點和熱點問題。心肌細胞凋亡是心肌缺血再灌糖培養(yǎng)基、Opti-MEM培養(yǎng)基(美國Gibco公司),胎注損傷的主要病理改變,長期的心肌細胞凋亡可以牛血清(杭州四季青生物工程有限公司);Annexin導(dǎo)致臨床早期心肌舒張功能降低,晚期合并心肌收V-FITC凋亡檢測試劑盒(上海貝博生物技術(shù)有限公縮功能障礙及心臟衰竭的形成。因此,減少再灌注司);Hoechst33258染色試劑盒(南京凱基生物科技期心肌細胞的損傷
8、是減輕MIRI的有效途徑。Ghre-發(fā)展有限公司);GHSR、B淋巴細胞瘤-2蛋白(B-2015-03-27接收celllymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2基金項目:國家自然科學(xué)基金(編號:81202631)associatedXprotein,Bax)及含半胱氨酸的天冬氨酸1作者單位:安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科,合肥230601蛋白水解酶-3(cysteinylaspartatespecificproteinase2安徽中醫(yī)藥
