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《醫(yī)院制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說明模版.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、191919193.6.4微生物限度3.6.4.1方法驗(yàn)證材料與依據(jù)3.6.4.11供試品：參榆灌腸液規(guī)格：XXX生產(chǎn)企業(yè)：江蘇省XXX醫(yī)院批號(hào):3.6.4.1.2培養(yǎng)基：1．營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基批號(hào)：廠家：XXX192．玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基批號(hào)：廠家：XXX3．營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基批號(hào)：廠家：XXX4．膽鹽乳糖培養(yǎng)基批號(hào)：廠家：XXX5．MUG培養(yǎng)基批號(hào)：廠家：XXX3.6.4.1.3稀釋劑:pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液500ml/瓶,批號(hào)：(如緩沖液為市場(chǎng)購(gòu)買，需寫明生產(chǎn)企業(yè))3.6.4.1.4菌種：菌種名稱編號(hào)來源傳代次數(shù)大腸埃希菌(E
2、scherichiacoli)CMCC（B）44102南京市藥檢所第3代金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)CMCC（B）26003南京市藥檢所第3代銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)CMCC（B）10104南京市藥檢所第3代枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）CMCC（B）63501南京市藥檢所第3代白色念珠菌(Candidaalbicans)CMCC（F）98001南京市藥檢所第3代黑曲霉(Aspergillusniger)CMCC（F）98003南京市藥檢所第3代3.6
3、.4.1.5驗(yàn)證依據(jù)：《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄XIJ微生物限度檢查法方法驗(yàn)證。3.6.4.2驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)操作根據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄微生物限度檢查法方法，采用常規(guī)法（如常規(guī)法回收率未達(dá)70%，需采用培養(yǎng)基稀釋法重新進(jìn)行驗(yàn)證；如培養(yǎng)基稀釋法回收率仍未達(dá)70%，可采用薄膜過濾法再次進(jìn)行驗(yàn)證）對(duì)細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證?？刂凭鷻z查方法采用常規(guī)法（若陽性未生長(zhǎng)采用培養(yǎng)基稀釋法或薄膜過濾法），從而建立該樣品的微生物限度檢查方法。3.6.4.2.1菌液制備方法：1.19接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假
4、單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,置350C培養(yǎng)24小時(shí)，分別取上述培養(yǎng)物1ml加9ml0.9％的無菌氯化鈉溶液，10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數(shù)為50～100cfu的菌懸液。2.接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，置250C培養(yǎng)48小時(shí)，取上述培養(yǎng)物1ml加9ml0.9％的無菌氯化鈉溶液，10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數(shù)為50～100cfu的菌懸液。3.接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中,置250C培養(yǎng)7天，加入5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％的無菌氯化鈉溶液,將孢子洗脫，并吸出孢
5、子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％的無菌氯化鈉制成每1ml含孢子數(shù)為50～100cfu的孢子懸液。3.6.4.2.2供試液制備：取供試品10ml,加pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液至100ml,混均,作為1：10供試液。3.6.4.3菌落計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證3.6.4.3.1平皿法：（常規(guī)法）①試驗(yàn)組：取1：10供試液1ml，分別加入10個(gè)平皿中，再依次加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉5種菌的菌懸液1ml(含50～100cfu)，每株菌平行制備2個(gè)平皿，立刻傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培
6、養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，分別置350C培養(yǎng)48小時(shí)和250C培養(yǎng)72小時(shí)。②菌液組：分別取上述稀釋的菌液1ml注入平皿內(nèi)，每個(gè)菌平行制備2個(gè)平皿，測(cè)定所加的試驗(yàn)菌數(shù)。③供試品對(duì)照組：取1：10供試液1ml分別注入4個(gè)平皿中，立刻注入營(yíng)養(yǎng)瓊脂和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每種培養(yǎng)基制備2個(gè)平皿，分別置350C培養(yǎng)48小時(shí)和250C培養(yǎng)72小時(shí)。以測(cè)定供試品的本底菌數(shù)。上述方法平行實(shí)驗(yàn)3次④結(jié)果見表1表1.參榆灌腸液細(xì)菌.霉菌和酵母菌回收率的測(cè)定（平皿法）菌種類型試驗(yàn)次數(shù)試驗(yàn)組菌液組供試品對(duì)照組回收率（%）試驗(yàn)組19大腸埃希菌14749095
7、.9265620100361560100金黃色葡萄球菌13633010024445097.8345410100枯草芽孢桿菌13842090.524750094.036267092.5白色念珠菌14548083.323539089.735055090.9黑曲霉13438089.522731087.132829096.6試驗(yàn)組菌回收率(%)＝由表1可見參榆灌腸液用平皿菌落計(jì)數(shù)法，三次平行試驗(yàn)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉的菌落回收都達(dá)到了70%，說明常規(guī)平皿法用于參榆灌腸液計(jì)數(shù)結(jié)果是準(zhǔn)確的。備注：如采用常規(guī)
8、平皿法菌落回收率都達(dá)到70%，則細(xì)菌、霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證即可完成，但如常規(guī)法一種或幾種菌回收率三次均低于70%，需采用培養(yǎng)基稀釋法重新進(jìn)行試驗(yàn)，具體操作如下：若細(xì)菌回收率低于70%則細(xì)菌數(shù)計(jì)數(shù)采用培養(yǎng)基稀釋法，霉菌回收率低于7
