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《從獼猴肝臟組織擴(kuò)增黃嘌呤脫氫酶／氧化酶基因片段-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、2013年10月中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)October，2013第21卷第5期ACTALABORATORIUMANIMALISSCIENTIASINICAVo1．2lNo．5從獼猴肝臟組織擴(kuò)增黃嘌呤脫氫酶／氧化酶基因片段唐東紅，罕圓圓，羅云，王城寬，黃英，畢正生，葉尤松(1．中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所，昆明650118；2．云南省中醫(yī)學(xué)院，昆明650200)【摘要】RT-PCR擴(kuò)增獼猴黃嘌呤脫氫酶／氧化酶(XDH／XO)基因片段，為進(jìn)一步開(kāi)展相關(guān)研究提供實(shí)驗(yàn)資料。方法提取獼猴新鮮肝臟組織總R
2、NA，用RT—PCR二步法進(jìn)行XDH／XO基因片段擴(kuò)增，對(duì)獲得的目的片段進(jìn)行序列測(cè)定，與GenBank上發(fā)表的人類(lèi)(Homosapiens)、小鼠(Musmusculus)、家鼠(Rattusnorvegicus)、野豬(Susscrofa)等物種XDH／XO基因進(jìn)行該序列同源性比對(duì)分析，DNAMAN軟件預(yù)測(cè)該段核苷酸的氨基酸序列，Inter—ProScan及SWISS·MODEL工具進(jìn)行XDH／XO的編碼蛋白結(jié)構(gòu)域及功能預(yù)測(cè)及三維結(jié)構(gòu)構(gòu)建。結(jié)果RT．PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)得到了與設(shè)計(jì)大小相一致的目的條帶
3、，序列測(cè)定共測(cè)到683個(gè)核苷酸，DNAMAN軟件預(yù)測(cè)該段核苷酸的氨基酸序列包括了1個(gè)編碼53個(gè)氨基酸的開(kāi)放閱讀框(ORF)，通過(guò)該軟件包中Multiplealignment對(duì)目的基因片段的核苷酸序列與NCBI報(bào)道的人類(lèi)、小鼠、家鼠、野豬XDH／XO基因mRNA互補(bǔ)的cDNA核苷酸序列同源性進(jìn)行同源性比較分析，結(jié)果顯示所擴(kuò)增得到的目的片段與人類(lèi)同源性最高，為95．6％，與小鼠、家鼠、野豬的同源性分別為85．2％、84．3％、86．1％，說(shuō)明獲得的基因片段是獼猴的XDH／XO基因片段，且該基因在物種間具有
4、較高的相似性。生物信息學(xué)預(yù)測(cè)該段XDH／XO編碼蛋白含有醛氧化／脫氫酶的鉬喋呤結(jié)合點(diǎn)結(jié)構(gòu)域及黃嘌呤脫氫酶結(jié)構(gòu)域。結(jié)論在體外成功擴(kuò)增出獼猴XDH／XO基因片段，為進(jìn)一步開(kāi)展高尿酸血癥致病機(jī)理研究，抗高尿酸血癥新藥研發(fā)奠定工作基礎(chǔ)?！娟P(guān)鍵詞】獼猴；XDH／XO基因片段；RT—PCR；肝臟組織；測(cè)序【中圖分類(lèi)號(hào)】Q95-33【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-4847(2013)05~057—07Doi：10．3969／i．issn．1005—4847．2013．05．012PCRamplificatio
5、nofthexanthinedehydrOgenase／0xidasegenefragmentfromthelivertissueofrhesusmonkeyTANGDong—hong，HANYuan—yuan，LUOYun，WANGChen-kuan，HUANGYing，BIZheng—sheng，YEYou．song(1．InstituteofMedicalBiology，ChineseAcademyofMedicalSciences／PekingUnionMedicalCollege，Kunmi
6、ng650118，China；2．YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine，Kunming650118)【Abstract】0bjectiveToamplifythexanthinedehydrogenase／0xidase(XDH／XO)genefragmentfromthelivertissueofrhesusmonkey．MethedsTotalRNAwasextractedfromthelivertissueforamplificationofX
7、DH／XOgenefrag—mentbytwo—stepRT—PCR．ThesequenceofamplifiednucleotideacidswasanalyzedbymultiplealignmentofDNAMANsoftwareaftergelelectroph0resisandsequencing．Thesequenceswerecomparedwiththatoftheotherspecies(Homosapi—ens，Musmusculus，Rattusnorvegicus，Susscr
8、ofa)searchedfromGenBank．SequencingresultsbyDNAMANsoftwarepre—dictedtheaminoacidsequence．Conserveddomainsandproteinthree—dimensionalstructureofXDH／XOwasanalyzedbyInterProScanandSWISS·MODEL．ResultsTheexpected683bpfragmentwasobtaine
