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《miR-19b對(duì)HepG2細(xì)胞增殖和凋亡的影響-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、·1222·安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Sep；49(9)miR．19b對(duì)HepG2細(xì)胞增殖和凋亡的影響曹靜，賈振亞，范文潔，徐碉，范璐璐，孫國(guó)平摘要目的研究miR一19b對(duì)HepG2細(xì)胞增殖和凋亡的影1．1．1細(xì)胞株人肝癌HepG2細(xì)胞株購(gòu)自中國(guó)科響。方法根據(jù)前期miRNA芯片結(jié)果提示丹皮酚處理后人學(xué)院上海生命科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)，本課題組凍存。肝癌HepG2細(xì)胞的miR一19b表達(dá)增加，采用qRT—PCR驗(yàn)證1．1．2藥品及試劑丹皮酚注射液購(gòu)自上海第一丹皮酚處理HepG
2、2細(xì)胞的miR一19b表達(dá)改變；將hsa-miR-制藥廠(規(guī)格10mg／2ml，批號(hào)990402)；四甲基偶19bmimics瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，采用qRT—PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率，MTI'比色法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞體外增殖抑制率，TUNEL氮唑鹽(nYr)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；高糖DMEM培染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。結(jié)果qRT-PCR驗(yàn)證養(yǎng)液購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；胎牛血清購(gòu)自杭州四季62．5mg／L丹皮酚處理人肝癌HepG2細(xì)胞24h后miR一19b青生物工程材料研究所；胰蛋白酶購(gòu)自江蘇碧云天差異表達(dá)明顯。過(guò)表達(dá)miR一
3、19b可以抑制HepG2細(xì)胞增殖生物技術(shù)研究所；PI試劑盒購(gòu)自美國(guó)BD公司；和促進(jìn)其凋亡。結(jié)論丹皮酚作用可以引起肝癌細(xì)胞miR一TUNEL染色試劑盒購(gòu)自德國(guó)Roche公司；Lipo—19b表達(dá)出現(xiàn)差異性表現(xiàn)。過(guò)表達(dá)miR一19b可能是丹皮酚fectamine2000、TRIzol購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；抑制HepG2細(xì)胞增殖和促進(jìn)凋亡作用的部分機(jī)制。關(guān)鍵詞肝癌；HepG2；丹皮酚；miR一19b；細(xì)胞凋亡hsa-miR一19bmimicsf5一UGUGCAAAUCCAUGCAAA中圖分類(lèi)號(hào)R282．71；R735．7
4、ACUGA．3)、陰性對(duì)照(5．UuCUCCGAACGUGU—文獻(xiàn)標(biāo)志碼A文章編號(hào)1000—1492(2014)09—1222—05CACGUTF．3)、Hairpin．itmiRNAsRTPCRQuanti—tationKit及U6snRNAReal—timeRT—PCRNormaliza—微小RNA(microRNAs，miRNAs)是真核生物中tionKit均購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司。廣泛存在的一類(lèi)約含有22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈1．1．3主要儀器Nacpo-6100CO2培養(yǎng)箱(美國(guó)小分子RNA，功能是在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)
5、控基因的表杜邦公司產(chǎn)品)；YJ．1450型醫(yī)學(xué)凈化工作臺(tái)(蘇州達(dá)。異常表達(dá)的miRNAs與腫瘤的增殖、分化、凋亡凈化設(shè)備公司)；IX-70熒光倒置式顯微鏡(日本0一和轉(zhuǎn)移有著密切的聯(lián)系。近年研究?提示miRNAslympus光學(xué)工業(yè)株式會(huì)社產(chǎn)品)；EL301Stripreader廣泛參與到中藥抗腫瘤的作用過(guò)程中，從miRNAs酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tek公司)；EPICSXL—MLC流式細(xì)水平探討中藥的抗癌機(jī)制為腫瘤臨床治療提供了新胞儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司)；GL-20A全自動(dòng)高的依據(jù)和研究思路。丹皮酚是藥理活性廣泛、高效、速
6、冷凍離心機(jī)(湖南儀器儀表廠離心機(jī)廠)；熒光定低毒的中藥，已被證實(shí)對(duì)肝癌、肺癌等多種腫瘤細(xì)胞量PCR儀(ThermoPIKOREAL96)。株有增殖抑制作用，其抗腫瘤機(jī)制也成為研究熱1．2方法點(diǎn)。目前丹皮酚的作用機(jī)制與miRNAs的關(guān)系1．2．1細(xì)胞培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞HepG2培養(yǎng)于含尚未見(jiàn)報(bào)道。該課題組前期芯片結(jié)果提示丹皮酚作10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液中，置37℃、用人肝癌HepG2細(xì)胞后miR一19b表達(dá)上調(diào)，為此，5％CO：培養(yǎng)箱培養(yǎng)，常規(guī)消化、傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)該研究通過(guò)驗(yàn)證miR．19b的表達(dá)差異并探討其對(duì)肝期細(xì)胞用
7、于實(shí)驗(yàn)。癌HepG2細(xì)胞增殖和凋亡的影響，以進(jìn)一步探討丹1．2．2藥物處理及總RNA提取取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期皮酚的抗腫瘤機(jī)制，為肝癌的臨床治療提供理論基HepG2細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞貼壁后，實(shí)驗(yàn)組礎(chǔ)加入62．5mg／L丹皮酚，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組。241材料與方法h后收集細(xì)胞，經(jīng)冰PBS洗滌2次，每孔加入1mlTRIzol試劑吹打混勻，靜置5min后轉(zhuǎn)移至經(jīng)DEPC1．1材料水處理的無(wú)RNA酶EP管中，收集總RNA，具體步2014—02—12接收驟按照說(shuō)明書(shū)操作。所得總RNA用紫外分光光度基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào)：8127
8、2739、81071986)儀測(cè)純度及濃度，取A260／A280=1．8～2．0總RNA，作者單位：安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科，合肥230022分裝于一8O℃冰箱保存。作者簡(jiǎn)介：曹靜，女，碩士研究生；孫國(guó)平，男，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-1．2．3qRT．
