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《miRNA-106a在肝癌中的表達(dá)及其作用-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、陜西醫(yī)學(xué)雜志2Ol4年2月第43卷第2期139一陳～=～莖一酵一～一-一～要～一～一～一陳一～一_～腿一～一～一莖叭一～～一一～Ⅲ～一～一～～一．一№一～一～一～№一～枷一一．一盹～耨&一一～耋一妻miRNA一106a在肝癌中的表達(dá)及其作用西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院(西安710061)陳雙江△王錚◇姚英民◇郭雄▲摘要目的：檢測(cè)miRNA一106a(miR一106a)在肝癌中的表達(dá)情況，體外觀察其對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG一2細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。方法：取肝癌手術(shù)標(biāo)本及其對(duì)應(yīng)的癌旁組織，通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)miR一106a在肝癌中的表達(dá)情況，轉(zhuǎn)染miR一106am
2、imics或inhibitors及其NC對(duì)照后，用MTT法檢測(cè)肝癌細(xì)胞株HepG一2的增殖能力變化，使用transwell小室檢測(cè)侵襲能力變化，同時(shí)使用實(shí)時(shí)定量PCR和Westernbolt觀察干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)TGFBR2及EMT指標(biāo)E—cadherin、N—cadherin和Vimentin的mRNA及蛋白水平變化。結(jié)果：miR一106a在肝癌中上調(diào)，轉(zhuǎn)染miR一106amimics后肝癌細(xì)胞增殖率升高，侵襲能力加強(qiáng)，實(shí)時(shí)定量PCR和Westernbolt結(jié)果顯示TGFBR2表達(dá)受到抑制，EMT指標(biāo)E—cadherin表達(dá)下調(diào)N—cadherin和Viment
3、in的表達(dá)上調(diào)，而轉(zhuǎn)染miR一106ainhibitors后結(jié)果相反。結(jié)論：miR一106a在肝癌中上調(diào)，促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖、侵襲，其機(jī)制可能與抑制TGFBR2和E—cadherin，上調(diào)N—cadherin和Vimentin的表達(dá)有關(guān)。主題詞肝腫瘤微RNAs細(xì)胞增殖基因表達(dá)調(diào)控，腫瘤【中圖分類號(hào)1R735．7【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】Adoi：10．3969／j．issn．1000—7377．2014．02．004肝癌是發(fā)病率較高的腫瘤之一，其惡性程度高、進(jìn)對(duì)應(yīng)的癌旁組織中的表達(dá)情況，并通過人工合成miR一展快、病死率高，確診時(shí)大部分已屬中晚期，從而失去106amimi
4、cs或inhibitors轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株HepG～2，治療的最佳時(shí)機(jī)，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響肝癌預(yù)后的主要觀察其對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響，并探討其因素。微核糖核酸(miRNA)是一類進(jìn)化上高度保守、內(nèi)在分子機(jī)制。內(nèi)源性的非編碼單鏈小RNA，可以通過抑制或降解靶材料與方法基因mRNA從而達(dá)到抑制靶基因的作用¨】]。有研究1材料西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院顯示大概有60編碼蛋白的基因受到miRNA的調(diào)外科手術(shù)切除的肝癌組織及其對(duì)應(yīng)癌旁正常組織20控l_2]。miRNA一106a(miR一106a)作為一種上調(diào)的致癌例(男14例，女6例，平均年齡56．7歲)，術(shù)
5、后均經(jīng)病基因在許多腫瘤中被證實(shí)]。我們通過實(shí)時(shí)定量理檢查確認(rèn)。標(biāo)本收集后置于一8O℃冰箱保存，所有PCR技術(shù)檢測(cè)miR一106a在2O例肝癌手術(shù)標(biāo)本與其患者術(shù)前均未經(jīng)放療、化療。人肝癌細(xì)胞HepG一2由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)研究實(shí)驗(yàn)中心提供并?！麝兾魇“部凳凶详柨h人民醫(yī)院普外科存。DMEM培養(yǎng)基及胎牛血清購自美國Gibco公司?！笪靼步煌ù髮W(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院TRIzol試劑購自美國ambion公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購▲通訊作者自日本TaKaRa公司，所有引物委托北京鼎國昌盛公140陜西醫(yī)學(xué)雜志2014年2月第43卷第2期司設(shè)計(jì)并合成，實(shí)時(shí)定量PCR試劑SY
6、BRGreenReal—tin的表達(dá)情況(以GAPDH做內(nèi)參)。反應(yīng)條件：變性timePCRMasterMix購自日本TaKaRa公司，脂質(zhì)95℃30s，退火60℃30s，延伸72。C30s，共4O個(gè)循環(huán)，體2000轉(zhuǎn)染試劑購自美國Invitrogen公司，miR一10672C延伸5min終止反應(yīng)。所有反應(yīng)均設(shè)一立3個(gè)一砌復(fù)孔，～mimics／inhibitors及NC對(duì)照購自上海吉瑪公司，用2△△n計(jì)算癌組織比癌旁組織的相對(duì)表達(dá)量。MTT購自美國Sigma公司，DMSO購自美國Sigma6細(xì)胞培養(yǎng)及分組細(xì)胞株用含10小牛血清公司，transwell小室購自
7、美國Millipore公司；Matri—和雙抗的DMEM培養(yǎng)基在37℃，5CO。的培養(yǎng)箱中g(shù)el基質(zhì)膠購自美國BD公司，GAPDH、TGFBR2、E—培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)將肝癌細(xì)胞分為3組，mimics組(即轉(zhuǎn)染cadherin、N—cadherin和Vimentin抗體均購自美國miR一106amimics組)、NC組(轉(zhuǎn)染無意義寡核苷酸Santacruze公司。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。組)、inhibitors組(即轉(zhuǎn)染miR一106ainhibitors組)。2總RNA提取稱取保存在一80℃冰箱中的細(xì)胞接種于6孔板中，待融合度為5O時(shí)按Lipo2000組織10m
8、g，在冰上用一次性研磨皿磨碎，并加入1ml說明書分別
