倒平板、劃平板、涂布操作步驟.doc

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1、倒平板、劃平板、涂布操作步驟一、無菌準(zhǔn)備：1、提前1個(gè)小時(shí)打開無菌室紫外燈消毒滅菌1、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒；2、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種的用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；3、所有無菌操作都需在酒精燈旁操作。二、培養(yǎng)基配置：1、LB肉湯：肉湯粉330g、5g葡萄糖、1000ml蒸餾水；2、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：瓊脂培養(yǎng)基粉300g、5g葡萄糖、1000ml蒸餾水。三、倒平板操作：1、將滅菌過的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰；2、用左手將培養(yǎng)皿打開一條

2、稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基（約10～20ml）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，輕輕搖勻。2、等待平板冷卻凝固（大約需5～10min）后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上。四、平板劃線操作：1、將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅；2、在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的棉塞；3、將試管口通過火焰；將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液；將試管口通過火焰，并塞上棉塞；4、左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。5、

3、灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)域的劃線與第一區(qū)相連。6、將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。五、涂布平板操作：1、將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中；2、取少量菌液（不超過0.1ml），滴加到培養(yǎng)基表面；3、將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s；4、用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻。注意：1、將涂布器末端浸在盛有體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精的燒杯中。取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后

4、將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。2、操作中一定要注意防火！不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。