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《抗鵝細(xì)小病毒NSI蛋白單鏈抗體的構(gòu)建、表達(dá)及活性初步鑒定.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、HeilongjiangAnimalScience80andVeterinaryMedicineNo12200910000倍稀釋的DuIFN一處理的鴨胚成纖維細(xì)胞一43a(+)具有組氦酸標(biāo)簽(His—Ta)，可方便用于全部發(fā)生皺縮，變圓，病變程度接近陽(yáng)性對(duì)照。經(jīng)計(jì)蛋白的精細(xì)純化。算，DuIFN一抗病毒活性約為1000U／mL，比活力豬水泡性口炎病毒廣泛用于人類干擾素效價(jià)的為5000U／mg。評(píng)價(jià)。在我國(guó)，按《中國(guó)生物制品規(guī)程》(1995)中要3討論求采用WISH／VSV體系(WISH細(xì)胞為人羊膜細(xì)胞)通常情況下，動(dòng)物機(jī)體只在一定誘因下產(chǎn)生干擾測(cè)定，根據(jù)干擾素對(duì)WISH細(xì)胞的保
2、護(hù)性，即細(xì)胞的素，病毒是最常見的干擾素誘生劑。除了病毒，干擾病變程度按5級(jí)打分法記錄不同濃度時(shí)的保護(hù)性，用素誘導(dǎo)劑還有細(xì)胞內(nèi)微生物(包括細(xì)菌、支原體、衣國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品(Lot03／94)為參考標(biāo)定其IU值。由于原體、瘧原蟲等)、細(xì)菌產(chǎn)物(如真菌多糖)、多聚物干擾素的抗病毒效果不是直接的，它是通過作用于受(如多核苷酸等)、低分子物質(zhì)(如卡那霉素等)、某些體細(xì)胞激活一系列酶系統(tǒng)表達(dá)出抗病毒活性物質(zhì)而植物藥(如黃芪等)、細(xì)胞有絲分裂素(如PHA、Co．達(dá)到抗病毒效果，所以干擾素與其受體細(xì)胞間的結(jié)合hA)等。研究從新城疫病毒刺激的鴨脾淋巴細(xì)胞培具有特異性，從而導(dǎo)致它具有種屬特異性，因此評(píng)
3、價(jià)養(yǎng)液中提取基因組，采用RT—PCR技術(shù)擴(kuò)增鴨一不同的干擾素要選擇不同的指示細(xì)胞。動(dòng)物干擾素干擾素基因，結(jié)果表明該方法是可行的。研究較晚，特別是對(duì)鴨干擾素研究更少，目前亦無(wú)參試驗(yàn)選用pET一43a(+)載體和大腸桿菌BL21照的標(biāo)準(zhǔn)品，更無(wú)統(tǒng)一的檢測(cè)規(guī)范。對(duì)禽類干擾素效(DE3)感受態(tài)細(xì)胞作為原核表達(dá)系統(tǒng)。pET一43a價(jià)的評(píng)價(jià)，目前一般報(bào)道為本屬動(dòng)物成纖維細(xì)胞／(+)載體是較好地用于原核表達(dá)的載體，含有17VSV體系。本試驗(yàn)采用鴨胚成纖維細(xì)胞／VSV體系，RNA聚合酶啟動(dòng)子，能在溶原性大腸桿菌BL21感受通過該系統(tǒng)直接與對(duì)照細(xì)胞比較，以能抑制50％細(xì)態(tài)細(xì)胞中經(jīng)誘導(dǎo)后進(jìn)行高效
4、表達(dá)。BL21是含有噬菌胞病變的干擾素最高稀釋度為1個(gè)效價(jià)單位，經(jīng)測(cè)定體的大腸桿菌，包含lacUVS啟動(dòng)子基因和T7RNA表達(dá)蛋白1000U／mL對(duì)豬水泡性口炎病毒有明顯聚合酶基因。在BL21中，lacUVS啟動(dòng)子直接調(diào)控的抑制作用，為進(jìn)一步的動(dòng)物體內(nèi)抗病毒試驗(yàn)打下了T7RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)產(chǎn)生蛋白。pET基礎(chǔ)。(009)抗精細(xì)病毒NS1蛋白單鏈抗體的構(gòu)建表達(dá)及活性韌步鑒定王銳，鞠環(huán)宇，王兆鵬，衛(wèi)娜，霍慧，仇錚，馬波，王君偉(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030)中圖分類號(hào)：$852．659．2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1004—7034(2009)
5、12—0080—04鵝細(xì)小病毒(Gooseparvovirus，GPV)是小鵝瘟肽鏈長(zhǎng)度大小為NS1>NS2。NS1為磷酸化的蛋白，(Goslingplague，GP)的病原體，由于其感染雛鵝和其功能是：1)抑制細(xì)胞DNA的復(fù)制；2)對(duì)衣殼蛋白雛番鴨且傳播快、病死率高，引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛的啟動(dòng)子起正調(diào)節(jié)作用；3)對(duì)病毒DNA的復(fù)制是必重視。在病毒分類上鵝細(xì)小病毒為細(xì)小病毒科依賴須的；4)對(duì)P4啟動(dòng)子和異種啟動(dòng)子起負(fù)調(diào)節(jié)作用。病毒屬成員，基因組為單股、線性DNA，由5106個(gè)核隨著基因工程抗體技術(shù)的發(fā)展，將單克隆抗體改苷酸組成，含有2個(gè)開放閱讀框架，左側(cè)ORF編碼造成為具有抗
6、原結(jié)合能力的Fab、Fv、ScFv等抗體片2個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1和NS2)，右側(cè)ORF編碼3個(gè)結(jié)段，已成為抗體生物治療的主要研究方向。單鏈抗構(gòu)蛋白VP1、VP2、VP3，編碼非結(jié)構(gòu)蛋白二者基因的體(singlechainfragmentofvarietyregion，ScFv)是具起始密碼子的位置不同，但共用終止同一密碼子，它有親代抗體全部抗原結(jié)合特異性的最小功能結(jié)構(gòu)單們的氨基酸序列按肽鏈C端到N端方向完全重疊，位，具有組織穿透力強(qiáng)、分子質(zhì)量小、免疫原性低、血流中半衰期短等特點(diǎn)。試驗(yàn)從分泌抗GPV—NS1單收稿日期：2009—03—05：修回日期：2009—10—10克隆抗體
7、的雜交瘤細(xì)胞中克隆得到抗體的重鏈和輕基金項(xiàng)目：王銳(1982一)，男，碩士研究生．鏈可變區(qū)基因，構(gòu)建抗GPV—NS1蛋白單鏈抗體基作者簡(jiǎn)介：王君偉(1960一)，男，教授，博士，博士生導(dǎo)師因，并將其在大腸桿菌中表達(dá)，試圖獲得具有生物活《黑龍江畜牧獸醫(yī)》科技版2009年12月(上)81性的單鏈抗體蛋白。所有引物均由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限1材料與方法公司合成。1．1材料1．2．2總RNA的提取與cDNA的制備在細(xì)胞培1．1．1細(xì)胞株、載體和菌種分泌抗GPV—NS1單養(yǎng)瓶中培養(yǎng)分泌抗GPV—NS1雜交瘤
