實(shí)驗(yàn)一-α-淀粉酶活力的測定.ppt

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1、實(shí)驗(yàn)一α-淀粉酶活力的測定[實(shí)驗(yàn)性質(zhì)]驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)[實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)]2學(xué)時(shí)[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯(1)掌握淀粉酶糖化淀粉的原理；(2)掌握淀粉酶的性質(zhì)及作用；(3)熟練α-淀粉酶活力測定方法。[實(shí)驗(yàn)原理]α-淀粉酶催化淀粉水解生成小分子可溶性糊精和少量的麥芽糖、葡萄糖，這些產(chǎn)物與碘反應(yīng)呈現(xiàn)不同的顏色。通過呈色反應(yīng)，可了解底物的降解速率，并以此可反映酶活力。[實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求]1.按照給定的實(shí)驗(yàn)方法，以可溶性淀粉為實(shí)驗(yàn)材料測定α-淀粉酶活力大小。2.實(shí)驗(yàn)要設(shè)置3次重復(fù)。[實(shí)驗(yàn)材料與試藥]1.實(shí)驗(yàn)材料可溶性淀粉、α-淀粉酶。

2、2.主要試藥結(jié)晶碘、碘化鉀、磷酸氫二鈉、檸檬酸、氯化鈷、重鉻酸鉀、絡(luò)黑T等。[儀器設(shè)備]電子天平、恒溫水浴鍋、溫度計(jì)、酸度計(jì)、抽濾機(jī)等。[器皿及耗材][試劑配制](1)原碘液稱取分析純結(jié)晶碘llg，分析純碘化鉀22g。先用少量蒸餾水使碘化鉀完全溶解，再溶解結(jié)晶碘，最后用蒸餾水定容至500mL，貯于棕色試劑瓶內(nèi)暗藏。(2)稀碘液取原碘液2mL，加碘化鉀20g，加蒸餾水溶解定容至500mL，貯于棕色試劑瓶內(nèi)暗藏。(3)0.02mol/L磷酸氫二鈉——檸檬酸緩沖溶液(pH6.0)稱取磷酸氫二鈉45.23g

3、和檸檬酸8.07g，用蒸餾水溶解定容至1000mL，配好后應(yīng)以酸度計(jì)校正pH值為6.0，置試劑瓶冷藏。(4)標(biāo)準(zhǔn)終點(diǎn)色溶液A液：稱取分析純氯化鈷12.0732ｇ和分析純重鉻酸鉀0.1463g，以蒸餾水溶解定容至150mL，置250mL試劑瓶暗藏。B液：稱取絡(luò)黑T8.0000mg，以蒸餾水溶解定容至100mL，置250mL試劑瓶暗藏。第一步：待測酶液的配制；第二步：標(biāo)準(zhǔn)色的配制；第三步：樣品的酶解反應(yīng)；第四步：計(jì)算。[實(shí)驗(yàn)步驟]1.待測酶液的制備A液B液2.標(biāo)準(zhǔn)色的配制3.樣品測定步驟混合液緩沖液淀粉

4、液60℃酶液酶液60℃,30min60℃,5min5mL20mL60℃30s60s90s120s180s210s0.5mL0.5mL碘液①②④⑤1.5mL2.0mL8.0mL1.0mL50mL1.000g250mL⑥150mLα-淀粉酶50mL溶解10mL可溶性淀粉2.0g煮沸冷卻100mL2%淀粉液③⑦α-淀粉酶活力1g酶粉(或lmL酶液)在60℃、pH6.0條件下，以1h(60min)液化可溶性淀粉的克數(shù)(或毫克數(shù))為1酶活力單位，即1IU，單位為可溶性淀粉量(g)/mL·min。60—酶活定義

5、中反應(yīng)時(shí)間為60min；T—反應(yīng)時(shí)間（min）；20—可溶性淀粉的毫升數(shù)；2%—可溶性淀粉濃度；N—酶液稀釋倍數(shù)；0.5—測定時(shí)所用的稀酶液量（ml）。酶活力單位（g/ml）=(60/T×20×2%×N)÷0.5[實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算]表1α-淀粉酶活力測定結(jié)果1.結(jié)果要取平均值，并以標(biāo)準(zhǔn)差表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2.要求實(shí)驗(yàn)過程中淀粉的顏色變化過程錄像或顏色變化終點(diǎn)要照像，并多媒體型實(shí)驗(yàn)結(jié)果單獨(dú)標(biāo)注班級(jí)和小組名提交或圖片型實(shí)驗(yàn)結(jié)果直接寫入在實(shí)驗(yàn)報(bào)告書里。[實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理要求]實(shí)驗(yàn)報(bào)告書的編寫要參考教師提出的寫作格式規(guī)

6、范。即：題目、作者（包括同組成員）、單位（班級(jí)和組別）、中文摘要、中文關(guān)鍵詞、英文摘要、英文關(guān)鍵詞、前言、材料與方法、結(jié)果與討論、結(jié)論、參考文獻(xiàn)等順序。2.報(bào)告書的篇幅要求2000字以上。3.參考文獻(xiàn)必須5篇以上，并至少有一篇英文。4.提交時(shí)間限為每周一下午3點(diǎn)。先交到課代表，由課代表匯總之后按時(shí)送到任課老師辦公室。5.領(lǐng)取的報(bào)告書要妥善保管，期末考試時(shí)作參考。[實(shí)驗(yàn)報(bào)告書書寫要求]1.考核形式現(xiàn)場操作、提問、報(bào)告書的評(píng)價(jià)等。2.考核點(diǎn)（1）現(xiàn)場考核看操作的準(zhǔn)確性和規(guī)范性。（2）提問的考核點(diǎn)注重分析

7、問題和解決問題的能力。（3）報(bào)告書的考核點(diǎn)主要考察報(bào)告書的結(jié)構(gòu)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性；實(shí)驗(yàn)的創(chuàng)意性；參考文獻(xiàn)的數(shù)量和質(zhì)量等。[考核形式及方法][思考題]1.請(qǐng)說出你所選用的α-淀粉酶活力測定方法是基于何種實(shí)驗(yàn)原理。2.在α-淀粉酶活力測定過程中影響活力的因素有什么？在實(shí)驗(yàn)過程中你采取什么措施防止其影響？3.舉例說明在實(shí)際工作中α-淀粉酶活力測定的必要性。4.在實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書上介紹的幾種α-淀粉酶活力測定方法中為什么本實(shí)驗(yàn)采用Wohlgemuth改良法？它有何種優(yōu)缺點(diǎn)？α-淀粉酶制劑的酶學(xué)特性及其應(yīng)用概述：中

8、溫α-淀粉酶采用枯草芽孢桿菌(BacillusSubtilis)經(jīng)深層發(fā)酵提煉而成。廣泛應(yīng)用于酒精、啤酒、味精、淀粉糖、發(fā)酵工業(yè)的液化以及紡織、印染退漿等。原理：能水解淀粉分子中的α-1.4葡萄糖苷鍵，任意切斷成長短不一的短鏈糊精及少量的低分子糖類，直鏈淀粉和支鏈淀粉均以無規(guī)則的形式進(jìn)行分解，從而使淀粉糊的粘度迅速下降，即“液化”作用，故又稱液化酶。產(chǎn)品特性：1、熱穩(wěn)定性：在60℃以下較為穩(wěn)定，最適溫度60-70℃，可適用于最高達(dá)90℃的液化過程。2、PH穩(wěn)定性：在P