實(shí)驗(yàn)三 細(xì)菌鑒定中的幾種生化試驗(yàn).ppt

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1、實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌鑒定中常用的幾種生化試驗(yàn)用生化的方法來檢測(cè)細(xì)菌對(duì)各種基質(zhì)的代謝作用及代謝產(chǎn)物，借以鑒別細(xì)菌種類，這種生化試驗(yàn)稱為細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗(yàn)；是鑒別細(xì)菌的重要依據(jù)。細(xì)菌的生化試驗(yàn)常見的生化反應(yīng)碳水化合物代謝試驗(yàn)碳源和氮源利用試驗(yàn)蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗(yàn)各種酶類試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)（MR）V-P試驗(yàn)檸檬酸鹽利用試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)IMViC試驗(yàn)硝酸還原酶試驗(yàn)，淀粉水解試驗(yàn)內(nèi)容一、糖發(fā)酵試驗(yàn)2、V-P試驗(yàn)1、吲哚試驗(yàn)三、淀粉水解試驗(yàn)二、IMViC試驗(yàn)3、MR試驗(yàn)說明2、本次實(shí)驗(yàn)均按傳統(tǒng)的生化試驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)現(xiàn)代快速生化檢測(cè)1、本次細(xì)菌的生化試驗(yàn)僅選擇5項(xiàng)代表性試驗(yàn)現(xiàn)代快速生化檢測(cè)現(xiàn)代快速

2、生化檢測(cè)采用的方式：簡(jiǎn)化試劑配制簡(jiǎn)化操作過程底物，指示劑、抑制劑的改良操作、檢測(cè)的高度自動(dòng)化4、自動(dòng)化微生物鑒定系統(tǒng)現(xiàn)代快速生化檢測(cè)1、顯色培養(yǎng)基3、快速檢測(cè)試紙2、生化鑒定管海博金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基環(huán)凱沙門氏菌顯色培養(yǎng)基顯色培養(yǎng)基生化鑒定管檸檬酸鹽生化鑒定管木糖生化鑒定管大盒生化鑒定管快速檢測(cè)試紙使用生化鑒定試劑盒對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌進(jìn)行細(xì)菌鑒定。全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)VITEK?全自動(dòng)化微生物鑒定系統(tǒng)1、掌握細(xì)菌生理生化反應(yīng)原理，掌握細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)的測(cè)定方法；2.通過不同細(xì)菌對(duì)不同含碳、含氮化合物的分解利用情況，了解細(xì)菌代謝類型的多樣性；3、了解細(xì)菌在不同培養(yǎng)

3、基中的不同生長(zhǎng)現(xiàn)象及其代謝產(chǎn)物在鑒別細(xì)菌中的意義。[目的要求]一、糖發(fā)酵試驗(yàn)[實(shí)驗(yàn)原理]根據(jù)細(xì)菌分解利用糖能力的差異表現(xiàn)出是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作為鑒定菌種的依據(jù)。各種糖細(xì)菌有機(jī)酸（乳酸、醋酸、丙酸等）氣體（氫氣，二氧化碳等）產(chǎn)酸：指示劑（溴甲酚紫），由紫色（pH6.8以上)變?yōu)辄S色（pH5.4以下)產(chǎn)氣倒置的德漢氏小管二、IMViC試驗(yàn)是一組試驗(yàn)；IMViC是靛基質(zhì)試驗(yàn)或稱吲哚試驗(yàn)（I）、甲基紅試驗(yàn)（M）、V-P試驗(yàn)（V）和檸檬酸鹽利用試驗(yàn)（C）的縮寫，i是為了發(fā)音的需要加上的；常用于革蘭氏陰性的腸道細(xì)菌檢測(cè)中，可用于區(qū)分產(chǎn)氣桿菌屬和大腸桿菌屬。1、吲哚（靛基質(zhì)）試驗(yàn)[原理]色氨酸幾乎存在所有蛋

4、白質(zhì)中，某些細(xì)菌如大腸桿菌等具有色氨酸酶。蛋白胨中的色氨酸色氨酸酶靛基質(zhì)（無色吲哚）吲哚試劑（對(duì)二甲基氨基苯甲醛）玫瑰吲哚（陽性反應(yīng)）2、V-P試驗(yàn)[原理]葡萄糖丙酮酸縮合乙酰乳酸脫羧乙酰甲基甲醇?jí)A性條件二乙酰與培養(yǎng)基中精氨酸的胍基結(jié)合紅色化合物（陽性反應(yīng)）3、MR試驗(yàn)[原理]葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH值降至4.5以下培養(yǎng)基變紅(陽性反應(yīng))甲基紅指示劑非酸性末端產(chǎn)物(醇、醛等）pH值＞6.2甲基紅指示劑培養(yǎng)基橘黃色(陰性反應(yīng))淀粉三、淀粉水解試驗(yàn)[原理]檢測(cè)細(xì)菌是否可以產(chǎn)生分泌到胞外的淀粉酶。淀粉酶糊精，雙糖和單糖等碘液不出現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)，菌落周圍呈現(xiàn)透明圈藍(lán)色[實(shí)驗(yàn)材料]培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵

5、培養(yǎng)基，乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，蛋白胨水培養(yǎng)基，固體淀粉培養(yǎng)基。菌種：大腸桿菌，枯草桿菌，普通變形菌，產(chǎn)氣腸桿菌試劑：盧戈氏碘液，甲基紅指示劑，40%KOH，5%α-萘酚，吲哚試劑，1.6%溴甲酚紫儀器：略[方法和步驟]1、??試管（平板）標(biāo)記葡萄糖發(fā)酵管乳糖發(fā)酵管吲哚試驗(yàn)管V-P試驗(yàn)管淀粉水解試驗(yàn)平板：4個(gè)各9支用記號(hào)筆或者標(biāo)簽紙?jiān)谄桨宓撞縿澇苫蛘邊^(qū)分為2部分2、接種培養(yǎng)試管接種：以無菌操作分別接種少量待測(cè)菌到以上相應(yīng)試管中，每菌接2支管,留1管作空白對(duì)照不接種，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。葡萄糖和乳糖微量發(fā)酵管接種:采用接種針平板接種：以無菌操作分別接種少量待測(cè)菌

6、到以上相應(yīng)平板中,每平板接2種菌,將平板倒置在37℃溫箱中培養(yǎng)24h.①確定有無細(xì)菌生長(zhǎng)？②確定各菌對(duì)糖的分解利用情況：不利用：用“－”表示產(chǎn)酸：用“+”表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣：用⊕表示3、??觀察記錄（直接觀察記錄或加入試劑反應(yīng)后再觀察記錄）糖發(fā)酵試驗(yàn)（直接觀察記錄）1、確定有無細(xì)菌生長(zhǎng)？2、向蛋白胨水培養(yǎng)液內(nèi)加入乙醚1-2mL，用力振蕩，靜置分層后，沿管壁緩緩加入5-10滴吲哚試劑，若上層乙醚層呈玫瑰紅色者，為吲哚試驗(yàn)反應(yīng)陽性。吲哚（靛基質(zhì)）試驗(yàn)3、“+”表示陽性反應(yīng)，“-”表示陰性反應(yīng)。1、確定有無細(xì)菌生長(zhǎng)？并用空試管將葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液分為2半；2、將其中1半葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液內(nèi)加入5

7、-10滴40%KOH，然后加入等量的5%α-萘酚溶液，用力振蕩，再放入37℃溫箱中保溫15-30min。若培養(yǎng)物呈紅色者，為VP試驗(yàn)反應(yīng)陽性V-P試驗(yàn)3、“+”表示陽性反應(yīng)，“-”表示陰性反應(yīng)。1、將另一半葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液內(nèi)加入甲基紅試劑2滴，培養(yǎng)基變?yōu)榧t色者為陽性，變黃色者為陰性。MR試驗(yàn)2、“+”表示陽性反應(yīng)，“-”表示陰性反應(yīng)。1、觀察各種細(xì)菌的生長(zhǎng)情況；2、將平板打開蓋子，滴入少量碘液于平皿中，輕輕旋轉(zhuǎn)平板，使碘液均勻鋪