細菌鑒定中常用的生化實驗.ppt

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1、實驗八細菌鑒定中常用的生化實驗一、實驗?zāi)康恼莆仗前l(fā)酵試驗、淀粉實驗、吲哚實驗、M.R.及V.P的原理及方法。掌握以上實驗的用途。二、實驗原理淀粉實驗糖發(fā)酵實驗發(fā)酵后產(chǎn)生的有機酸：乳酸、醋酸、丙酸等（溴甲酚紫變色范圍pH5.2~6.8,pH<5.2黃色，pH>6.8紫色）發(fā)酵后產(chǎn)生的氣體：甲烷、氫、二氧化碳等（杜氏小管內(nèi)有氣泡，產(chǎn)氣漂?。┨前l(fā)酵試驗現(xiàn)象二、實驗原理M.R.及V.P實驗甲基紅試驗是用來檢測由葡萄糖產(chǎn)生的有機酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。當(dāng)細菌代謝糖產(chǎn)生酸時，培養(yǎng)基就會變酸，使加入培養(yǎng)基的甲基紅指示劑由橘黃色變?yōu)榧t色。二、實驗原理M.R.及V.P實驗VP試驗是用來測定某些細菌利

2、用葡萄糖產(chǎn)生非酸性或中性末端產(chǎn)物的能力，如丙酮酸。丙酮酸經(jīng)縮合、脫羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物。二、實驗原理吲哚實驗吲哚試驗是用來檢測吲哚的產(chǎn)生。有些細菌能產(chǎn)生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。吲哚與對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成紅色的玫瑰吲哚。三、實驗器材培養(yǎng)基1、淀粉培養(yǎng)基:500ml（分裝于四個三角瓶，包扎，121~126℃滅菌30min）蛋白胨10g可溶性淀粉2g氯化鈉5g瓊脂15~20g牛肉膏5g水1000mlpH7.22、糖發(fā)酵培養(yǎng)基：300ml（分裝于28只試管，包扎

3、，112~115℃滅菌30min）蛋白胨10g氯化鈉5g葡萄糖10g水1000mlpH7.4溴甲酚紫溶液（1.6%水溶液）1ml3、M.R.及V.P實驗:600ml（分裝于56只試管，包扎，112~115℃滅菌30min）蛋白胨5gK2HPO45g葡萄糖5g水1000mlpH7.2~7.44、吲哚培養(yǎng)基:300ml（分裝于28只試管，包扎，121~126℃滅菌30min）蛋白胨10g氯化鈉5g水1000mlpH7.6三、實驗器材菌種1、大腸桿菌2、枯草芽孢桿菌3、未知菌其他1、試管6組28個/組（每個試管帶一個德漢氏小管）2、平皿2組16個/組3、三角瓶2組8個/組四、實驗步驟（一）

4、準(zhǔn)備實驗器材，配制培養(yǎng)基（二）接種培養(yǎng)試驗名稱被接菌種1被接菌種2被接菌種3對照（管數(shù)）1.淀粉水解實驗大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌1支/每組不接種2.糖發(fā)酵大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌1支/每組不接種3.MR試驗大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌1支/每組不接種4.VP試驗大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌1支/每組不接種5.吲哚試驗大腸桿菌枯草芽孢桿菌葡萄球菌1支/每組不接種（三）結(jié)果觀察葡萄糖/乳糖發(fā)酵試驗，H2S產(chǎn)生試驗直接觀察。VP試驗：去塞，加40％KOH15滴，振蕩，再加等量α－奈酚，振蕩，37℃振蕩培養(yǎng)30min，觀察。MR試驗：加甲基紅試劑2－3滴，觀察。吲哚試驗：加1

5、ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振蕩，靜止片刻使分層，沿管壁慢慢加入吲哚試劑10滴，觀察。五、實驗結(jié)果及分析試驗名稱1.淀粉水解實驗2.糖發(fā)酵3.MR試驗4.VP試驗5.吲哚試驗大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌金黃色葡萄球菌對照六、思考題1、糖發(fā)酵試驗中，所安裝的杜氏小管起什么作用？2、V.P.試驗與M.R.試驗的最初作用物以及最終產(chǎn)物有什么異同？為什么會出現(xiàn)最終產(chǎn)物的不同。3、吲哚是細菌分解哪一種氨基酸的產(chǎn)物？