外周血PBMC的分離.doc

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1、外周血PBMC的分離原理n外周血各種血細胞的密度不盡相同，利用淋巴細胞分層液（Ficoll）作密度梯度離心，使一定比重的細胞群按相應密度梯度分布，從而將各種血細胞加以分離。1.093外周血紅細胞粒細胞單個核細胞血小板淋巴細胞單核細胞1.030~1.0351.075~1.090Ficoll：1.077±0.001(PBMC)1.0921500rpm,20℃,30minPBMC紅細胞粒細胞Ficoll稀釋外周血Ficoll稀釋的血漿、血小板實驗步驟n1.采血，稀釋（外周血：稀釋液=1：2）n2.在離心管中加入Ficoll，沿傾斜的管壁緩緩加入稀釋的外周血（Ficoll：稀釋血=1

2、：2）n3.18℃，1500r/min，離心30minn4.輕輕吸取PBMC層移入另一試管中n5.加足量稀釋液充分洗滌，1800r/min離心5min，棄上清。注意事項n每毫升外周血液大約可獲1×106單個核細胞nFicoll應適量，外周血應充分稀釋n溫度直接影響到Ficoll的比重和分離效果n在Ficoll上加入稀釋外周血時，應緩慢加，以免沖散界面n吸取單個核細胞層時，應避免吸出過多的上清液或分層液而導致血小板污染