丙二醛MDA含量的測(cè)定.ppt

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1、丙二醛（MDA）含量的測(cè)定丙二醛是膜脂過氧化最重要的產(chǎn)物之一。植物在逆境下遭受傷害與活性氧積累誘發(fā)的膜質(zhì)過氧化作用密切相關(guān)。植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件植物在逆境下遭受傷害（或衰老）與活性氧積累誘發(fā)的膜脂過氧化作用密切相關(guān)，膜脂過氧化的產(chǎn)物有二烯軛合物、脂類過氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂過氧化最重要的產(chǎn)物之一，因此可通過測(cè)定MDA了解膜脂過氧化的程度，以間接測(cè)定膜系統(tǒng)受損程度以及植物的抗逆性。原理丙二醛在高溫及酸性環(huán)境下可與2-硫代巴比妥酸（TBA）反應(yīng)產(chǎn)生紅棕色的產(chǎn)物3,5,5′-三甲基惡唑2,

2、4-二酮（三甲川），該物質(zhì)在532nm處有一吸收高峰，并且在660nm處有較小光吸收。根據(jù)其532nm的消光值可計(jì)算出溶液中丙二醛的含量。醛、可溶性糖對(duì)此反應(yīng)有干擾，在450nm處有一吸收峰，可用雙組分分光光度法加以排除。原理硫代巴比妥酸丙二醛3,5,5′-三甲基惡唑2,4-二酮（三甲川）儀器設(shè)備分光光度計(jì)；研缽；剪刀；恒溫水浴；試管：20mL×4離心機(jī)。試劑1.5%三氯醋酸；2.0.5%硫代巴比妥酸（用5%三氯醋酸溶解定容）；3.0.05mol·L–1磷酸緩沖液，pH7.8。材料正常生長(zhǎng)的以及經(jīng)逆境處理的小麥、玉米或其他植物的葉片。方法與

3、步驟1．取小麥植株上不同葉位的葉片3~5片，洗凈擦干，剪成0.5cm長(zhǎng)的小段，混勻。2．稱取葉片切段0.3g，放入冰浴的研缽中，加入少許石英砂和2mL0.05mol·L-1磷酸緩沖液，研磨成勻漿。將勻漿轉(zhuǎn)移到試管中，再用3mL0.05mol·L-1磷酸緩沖液，分三次沖洗研缽，合并提取液。3．在提取液中加入5mL0.5%硫代巴比妥酸溶液，搖勻。4．將試管放入沸水浴中煮沸10min，（自試管內(nèi)溶液中出現(xiàn)小氣泡開始計(jì)時(shí)）。到時(shí)間后，立即將試管取出并放入冷水浴中。5．待試管內(nèi)溶液冷卻后，3000×g離心15min，取上清液并量其體積。以0.5%硫代

4、巴比妥酸溶液為空白測(cè)532nm、600nm和450nm處的消光值。計(jì)算結(jié)果式中，Vt：提取液總體積（mL）；Vs：測(cè)定用提取液體積（ml）；FW：樣品鮮重（g）。注意事項(xiàng)1．可溶性糖與TBA顯色反應(yīng)的產(chǎn)物在532nm也有吸收（最大吸收在450nm），當(dāng)植物處于干旱、高溫、低溫等逆境時(shí)可溶性糖含量會(huì)增高，必要時(shí)要排除可溶性糖的干擾。2．低濃度的鐵離子能增強(qiáng)MDA與TBA的顯色反應(yīng)，當(dāng)植物組織中鐵離子濃度過低時(shí)應(yīng)補(bǔ)充Fe3+（最終濃度為0.5nmol·L-1）3．如待測(cè)液渾濁，可適當(dāng)增加離心力及時(shí)間，最好使用低溫離心機(jī)離心。思考題不同植物在同一

5、逆境下，丙二醛含量變化不同，說明了什么？