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《骨疏康顆粒含藥血清對成骨細胞增殖及細胞周期的影響.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、0fTraditionalChineseMedicine．December醫(yī)藥2010年12月箍鲞笠12塑旦_~2010．Vo1．2％N0．12骨疏康顆粒含藥血清對成骨細胞增殖及細胞周期的影響余興華【摘要】目的探討骨疏康顆粒含藥血清對體外培養(yǎng)大鼠成骨細胞增殖及細胞周期分布的影響。方法采用酶消化法進行大鼠成骨細胞培養(yǎng)，制備骨疏康顆粒含藥血清干預成骨細胞，以生理鹽水大鼠血清作對照，運用Mr丌法、流式細胞術(shù)檢測成骨細胞增殖情況及細胞周期分布。結(jié)果與同濃度生理鹽水血清比較，骨疏康含藥血清能不同程度地促進體外培養(yǎng)成骨細胞增殖，其中以20
2、％骨疏康含藥血清促增殖作用最顯著，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)，且能明顯降低G0／G1期細胞比例(P<0．O5)，提高S期成骨細胞比例及增殖指數(shù)(P<0．05)。結(jié)論骨疏康含藥血清能加速成骨細胞周期，促進成骨細胞增殖?！娟P(guān)鍵詞】成骨細胞；細胞增殖；細胞周期；骨疏康顆粒；含藥血清；實驗研究因各種原因破壞了骨形成與骨吸收之間的平1-3儀器衡，使骨形成低于骨吸收，骨量減少，骨結(jié)構(gòu)破壞，骨二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱：BB16／BB5060型，德國強度下降，即可導致骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生。因此，促進成Heraus公司：AIRTECH
3、無菌操作臺：蘇凈集團安泰骨細胞增殖、增加骨形成，是治療骨質(zhì)疏松癥的主要公司；OlyITIpus倒置相差顯微鏡：日本TKO光學儀方法之一。本研究擬利用體外成骨細胞培養(yǎng)，觀察中器株式會社：酶標儀：ELX808U，美國Bio—Tek；FAC．藥骨疏康含藥血清對成骨細胞增殖及細胞周期的影SCalibur流式細胞儀：美國BectonDickinson公司。響，旨在探討補腎中藥治療骨質(zhì)疏松癥的作用機制。1-4骨疏康含藥血清制備1材料與方法將3月齡清潔級雄性SD大鼠，隨機分為骨疏1．1動物康組和對照組，每組20只。骨疏康組按2g·kg·d用
4、于培養(yǎng)成骨細胞的動物為出生24h內(nèi)的SD給藥．以生理鹽水溶解灌胃。對照組每天灌服生理鹽大鼠，購自福建醫(yī)科大學動物房，合格證號：SYXK水2mL·d～。2組均連續(xù)灌胃7天，于最后一次灌胃(閩)2008—0001；用于制備藥物血清的動物為3月齡后lh腹主動脈無菌取血，常溫下靜置60min，3000清潔級雄性SD大鼠40只。體重240—280g，購于上r／min離心10min后取同組血清混合，56℃滅活補體海西普爾一必凱實驗動物中心．合格證號：SCXK30min，過濾除菌，一2O℃保存?zhèn)溆?。干預前用無血清(滬)2003—0002。D
5、MEM培養(yǎng)基稀釋成相應濃度的含藥血清。1．2藥品及試劑1．5新生大鼠成骨細胞的分離培養(yǎng)【】骨疏康顆粒：由淫羊藿、熟地黃、黃芪、丹參、骨新生SD大鼠放人75％酒精中浸泡消毒15碎補等組成。遼寧康辰藥業(yè)有限公司，國藥準字min，無菌操作下取出顱蓋骨．去除附著的血管及結(jié)Z20003255；低糖DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、青／鏈霉締組織，用HankS溶液清洗3次，將骨組織剪成1素、0．25％胰蛋白酶、Ⅱ型膠原酶：新西蘭Hyclonemm~1mm碎片．用含0．02％Ⅱ型膠原酶和0．25％公司產(chǎn)品；細胞堿性磷酸酶(CAKP)染色試劑盒：南胰
6、蛋白酶的混合消化液預消化20min，棄去消化京建成生物工程研究所；噻唑藍(Mq3')：Sigma公司：液。再加入0．02％Ⅱ型膠原酶溶液，37℃條件下將骨CycleTESTrMPlusDNAReagentKit：美國Becton片消化30min，期問反復振搖，重復操作5次，取最Dickinson公司。后3次消化液．將收集的消化液以1000r／min離心5min。所得白色沉淀物即為制得的成骨細胞團．用含10％胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)液重懸細胞作者單位：361004．廈門大學附屬中山醫(yī)院E京中醫(yī)藥2010年12月第29卷第
7、12BeiiingJournalofTraditionalChineseMedicine。Decetuber．2010．Vo1．29．No．12至2x10·mL一的細胞懸液，吹打均勻后，移進培養(yǎng)2結(jié)果瓶中，在37℃、5％CO、飽和濕度下培養(yǎng)．次日換液，2．1成骨細胞形態(tài)學觀察棄去懸浮細胞，以后每隔2天換液1次．直至細胞倒置相差顯微鏡下觀察。培養(yǎng)24h大部分細胞長成融合狀態(tài)進行細胞傳代。貼壁、伸展，細胞形態(tài)多樣化，多呈多邊形、紡錘形、1．6成骨細胞的鑒定方法梭形；培養(yǎng)3天后細胞增殖迅速，細胞胞體膨大，具取第3代細胞進行實驗，檢測
8、前進行成骨細胞有數(shù)量不等的細長突起，核大，多為圓形或橢圓形，鑒定。采用倒置相差顯微鏡每日觀察細胞的生長情居中或偏于細胞一側(cè)；隨著培養(yǎng)時間延長，細胞融合況及形態(tài)特征。重氮鹽法(改良Kaplow氏法)堿性磷成片，分界較為模糊。酸酶染色鑒定成骨細胞。2．2成骨細胞鑒定1．7成骨細胞
