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《AtEFS1基因在擬南芥開花調(diào)控途徑中的功能分析.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、分類號：Q壘!墨±QZ墨密級：公玨單位代碼：學(xué)號：100862008047AtEFSl基因在擬南芥開花調(diào)控途徑中的功能分析FunctionalAnalysisofAtEFSIGenewithRegulationofFloweringPathwaysinArabidopsisthaliana學(xué)位申請人：張靖指導(dǎo)教師：董金皋教授學(xué)科專業(yè)：植物學(xué)學(xué)位類別：理學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二。一一年五月二十九日獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他
2、人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得塑韭盔些盤堂或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解塑皇墾盎些盤堂有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)塑蘭墾盔些盤堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：
3、導(dǎo)師簽名：簽字日期：年月日簽字日期：年月日學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向：工作單位：通訊地址：電話：郵編：摘要研究植物開花時間調(diào)控的分子機制對于調(diào)節(jié)植物繁殖和發(fā)育、提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)具有重大的意義。實驗室前期研究從擬南芥T-DNA插入突變體庫中篩選獲得了一株早花突變體e居．J(earlyfloweringinshortmutant1)，通過GenomeWalking技術(shù)和生物信息學(xué)方法鑒定出一個新的擬南芥開花調(diào)控相關(guān)基因EFSl，通過互補回復(fù)和超表達試驗，確定了EFSl基因為擬南芥開花調(diào)控基因，利用RT-PCR和Real．TimePCR技術(shù)，初步確定了EFSl基
4、因可能通過GA、春化和光周期途徑調(diào)控擬南芥開花。為進一步明確EFSl基因在擬南芥開花調(diào)控途徑中的功能，本試驗利用反義RNA和RNAi技術(shù)，獲得EFSl基因功能缺失突變體，驗證了EFSl基因的功能；通過檢測春化，赤霉素對花期和EFSJ基因表達的影響，初步確定EFSl基因參與的擬南芥開花調(diào)控途徑；通過構(gòu)建及獲得并鑒定開花關(guān)鍵基因的超表達、T-DNA插入突變體，為進一步明確EFSl基因所參與的擬南芥開花調(diào)控途徑及在途徑中的位置奠定基礎(chǔ)。1．春化和赤霉素處理擬南芥野生型、咖．J『突變體、回復(fù)及超表達突變體，通過分析春化和赤霉素處理對花期及EFSl基因表達的影響，
5、初步確定了EFSl基因主要通過光周期途徑和赤霉素途徑控制著植物的成花。2．構(gòu)建了EFSl基因反義RNA和RNAi載體pCAMBIAl300．EFSlA和pCAMBIAl300．EFSli，經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化擬南芥突變體咖．J，通過潮霉素篩選和PCR鑒定，獲得了1I株RNAi轉(zhuǎn)基因植株和10株反義RNA轉(zhuǎn)基因植株。RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因植株中EFSl基因的表達均受到不同程度的抑制，確定所得轉(zhuǎn)基因植株均為EFSl基因的(反義RNA／RNAi)功能缺失突變體。對野生型和各種突變體植株的表型進行觀察，進一步確定了EFSl基因缺失導(dǎo)致植株早花。3．構(gòu)建了開花途
6、徑中關(guān)鍵基因CO和FLC的超表達載體pCAMBIAl300．CO和pCAMBIAl300-FLC，經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化擬南芥野生型C01．0。通過潮霉素篩選及PCR和RT-PCR鑒定，獲得9株CO超表達轉(zhuǎn)基因植株和8株FLC超表達轉(zhuǎn)基因植株。4．從擬南芥SALK庫中獲得了擬南芥開花途徑中關(guān)鍵基因GI,CO、三月KFVE及EFSl的ToDNA插入突變體(SALK一092757、CS870084、SALK一149287、SALK一027724(CS878321)和SAIL一122一H09)。利用PCR技術(shù)，獲得了GI,CO、LHY、FVE及EFSI基因的純合突變
7、體。5．構(gòu)建了EFSl基因的酵母誘餌表達載體pASl．-EFS-CDS，為進一步篩選EFSl的互作蛋白奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：擬南芥；早花；RNAi；RT-PCR；超表達FunctionalAnalysisofAtEFSlGenewithRegulationofFloweringPathwaysinArabidopsisthalianaAuthor：ZhangJingSupervisor：ProfessorDONGJin·gaoMajor：BotanyAbstractTllefloweringtransformationprocessinhigherplant
8、sisstrictlycontrolledbyboththeinherentre
