卵磷脂的制備及鑒定.doc

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1、卵磷脂的制備及鑒定一、實驗目的要求1、熟悉雞蛋黃制備卵磷脂的原理。2、掌握卵磷脂的制備與減壓蒸餾的基本操作方法。二、實驗重點和難點從蛋黃中制備卵磷脂的操作方法。三、實驗原理將卵黃中加乙醇，卵磷脂溶于乙醇溶液中，分離提取，蛋白質等某些雜質從沉淀物中除去。但由于乙醇抽提時，其他脂質也一起被抽提，如甘油三酯、甾醇等。利用卵磷脂不溶于丙酮的性質，用丙酮從粗卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂與其他脂質和膽固醇分離開來。無機鹽和卵磷脂可生成絡合物沉淀，因此，可利用金屬鹽沉淀劑將卵磷脂從溶液中分離出來，由此除去蛋白質、脂肪等雜質，再用適當溶劑萃取出無機鹽和其他磷脂雜質。四、實驗儀器、

2、試劑與材料1、儀器：離心機、旋轉薄膜蒸發(fā)儀、布氏漏斗、抽濾瓶、真空干燥箱、層析缸、紫外分光光度計。2、試液：l0%的ZnCl2溶液：取氯化鋅10g，加水溶解并稀釋至100ml，搖勻，即得。3、試劑與材料：氯化鋅、95%乙醇、丙酮、氯仿、碘、甲醇、無水乙醇。五、操作步驟1、粗提：取雞蛋卵黃適量，用2倍于卵黃體積的95%乙醇混合攪拌、提取，離心分離（300Or/min，5min），將沉淀物重復提取3次，回收上清液。然后減壓蒸餾（45℃）至近干，用少量石油醚洗下粘壁的黃色油狀物。加入丙酮溶解，抽濾，分離出沉淀，真空干燥（40℃，3Omin），得到淡黃色的粗卵磷脂，稱重。2、

3、精制：取一定量的卵磷脂粗品，加無水乙醇溶解，得到約10%的乙醇粗提液。加入相當于卵磷脂質量的l0%的ZnCl2溶液，室溫攪拌0.5h。分離沉淀物，加適量冰丙酮（4℃）洗滌，攪拌lh，再用丙酮反復研洗，直到丙酮洗液為近無色止，得到白色蠟狀的精制卵磷脂；干燥；稱重。3、鑒定：（1）薄層色譜分析：取卵磷脂樣品與對照品分別制成2%氯仿溶液，用GF254硅膠板以氯仿：甲醇：水（65：25：4）為展開劑，展開，取出，干燥，碘蒸氣顯色。（2）紫外吸收光譜測定：將一定量卵磷脂制成0.l%無水乙醇溶液，照紫外分光光法在190～40Onm處測定，卵磷脂的紫外最大吸波長在215nm。六、結

4、果與討論1、計算卵磷脂收率，分析影響卵磷脂收率的主要因素。2、根據(jù)薄層色譜圖譜、紫外吸收圖譜分析所制備的卵磷脂的純度。