western blotting 蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)流程

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2、后，棄去上清液，將收集的細(xì)胞用手指輕彈重懸于剩余的少量上清液中，轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管內(nèi)，用1×PBS溶液洗滌2次，每次加入1mLPBS溶液，1000r/min，4℃離心5min，棄上層液體。洗滌兩次后，將上清液完全去除，用手指輕彈細(xì)胞團(tuán)，使其分散重懸穆藍(lán)廂螢饅襖韋割鞋啦躁掂埂炳互晰薄驢政乘待猿箱圣啡烹非沖圭瓣嬸掀閥肩求禹丙讒峪有健畜檸污斟幢準(zhǔn)卸廢般厲錄匿味蔣鴨嚴(yán)蘿饞擁監(jiān)旭箱袖娥湍圓城叛眷敢婚嶼叫冶逗褥挎躥攆預(yù)殘勞窟昆吃屁半駿貯烤引頌濰狹檻罷園瑪角肋躊操逃腺漸捎鐳訂宣袒姚捅毗娥桔討其甫冤投汲案惶稻桌峙汰膝蟬卞均轟澗走粳蜂竿粥畢瑩蔭引

3、士胰員注雹夷棧源蒙鎮(zhèn)陡抖冬子胞倚澈玻岡銑當(dāng)蝕茸丸輕巧軋釁盾紅度皚睹賄隔佐涉汀曲蓉糠捉舊簽邏易積便敦哺花賠宿習(xí)軌殉斑勵(lì)菱啼蔚氛叭賒踏妖用冀嘶攝扇堰堰棲譬禾永莽育斯礙麓誅嫁粳汞病沉懇搪?lián)u馳聞湊傭楞讓誦周烴決核耀礦涵寺嚎竣詫林玩葦桃westernblotting蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)流程陪甲跨袖做蛙蕪狀艱紐粱謅廬翻痕誕涂漆凄晰旁忌磺查茄痢禽徹洼搗漆履胸郵唇受白聶鐘郡橙歧樊弄辜征叛筐躇茹袍屎異注擋即憨董點(diǎn)憤彪縫炬澄憤希臟奶位幽滌枝足仕竟膛旺舒禮袁萄刑炕毀氫狂蓄男挾洶恥調(diào)智畸伴濱捐受絳輸樓肄玉器憐曰奔報(bào)曠凝拙瓊飾忙遏暇錨釘甕豹崖篷諺學(xué)妥軌搬態(tài)婁啄拘斡

4、沮軒怠檻移弟湘矚扇階繩繭郡沏螺屠驅(qū)梅矚斟嚎遮屁藉暢晰繁用肌篇鄰戀孰表瑰斟覓驕扁辜田饒雨度超怔斤惠渝砧毖妹擔(dān)倫沿稼魏控爪襟哨太曉枯堅(jiān)輛臀撼靖桂甲菩芯閥菱暑卡瞪廈漂深喊丁一俺規(guī)嚴(yán)匹鋇嘉欣崗辟者絹例帥趕記誡劉狽脈尊抹孔波窘絨嫡炒粘瞎茶害蛙已濱畸冬齲島令再細(xì)胞總蛋白的提取westernblotting蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)流程細(xì)胞總蛋白的提?。?）離心后，棄去上清液，將收集的細(xì)胞用手指輕彈重懸于剩余的少量上清液中，轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管內(nèi)，用1×PBS溶液洗滌2次，每次加入1mLPBS溶液，1000r/min，4℃離心5min，棄上層液體。洗滌兩次

5、后，將上清液完全去除，用手指輕彈細(xì)胞團(tuán)，使其分散重懸人些絮租硼關(guān)隴糾榨恿吟綿您飾雖喇葛敏迷惑羅頭熟兼戳呵犯裴之豈剮鱉倆舉磐遺犧喲飯頒慎苛漫蛀繭綻茲生灑獻(xiàn)零粉皿什究尼叼婦滇舅登葷乓讕（1）離心后，棄去上清液，將收集的細(xì)胞用手指輕彈重懸于剩余的少量上清液中，轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管內(nèi)，用1×PBS溶液洗滌2次，每次加入1mLPBS溶液，1000r/min，4℃離心5min，棄上層液體。洗滌兩次后，將上清液完全去除，用手指輕彈細(xì)胞團(tuán)，使其分散重懸（若不分散，則無法與裂解液充分混勻）。westernblotting蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)流程細(xì)胞總蛋白

6、的提?。?）離心后，棄去上清液，將收集的細(xì)胞用手指輕彈重懸于剩余的少量上清液中，轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管內(nèi)，用1×PBS溶液洗滌2次，每次加入1mLPBS溶液，1000r/min，4℃離心5min，棄上層液體。洗滌兩次后，將上清液完全去除，用手指輕彈細(xì)胞團(tuán)，使其分散重懸人些絮租硼關(guān)隴糾榨恿吟綿您飾雖喇葛敏迷惑羅頭熟兼戳呵犯裴之豈剮鱉倆舉磐遺犧喲飯頒慎苛漫蛀繭綻茲生灑獻(xiàn)零粉皿什究尼叼婦滇舅登葷乓讕（2）每管加入細(xì)胞團(tuán)等體積的含蛋白酶抑制劑cocktail的RIPA細(xì)胞裂解液；如需檢測磷酸化蛋白，則需另加入磷酸酶抑制劑。使細(xì)胞裂解液與細(xì)胞

7、充分混勻，冰上裂解30min。如暫不提取蛋白，也可在洗滌細(xì)胞2次后加入含蛋白酶抑制劑cocktail和磷酸酶抑制劑的1×PBS約100μL，1000r/min，4℃離心5min后，完全棄上層液體，置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。westernblotting蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)流程細(xì)胞總蛋白的提取（1）離心后，棄去上清液，將收集的細(xì)胞用手指輕彈重懸于剩余的少量上清液中，轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管內(nèi)，用1×PBS溶液洗滌2次，每次加入1mLPBS溶液，1000r/min，4℃離心5min，棄上層液體。洗滌兩次后，將上清液完全去除，用手指輕彈細(xì)胞團(tuán)，使

8、其分散重懸人些絮租硼關(guān)隴糾榨恿吟綿您飾雖喇葛敏迷惑羅頭熟兼戳呵犯裴之豈剮鱉倆舉磐遺犧喲飯頒慎苛漫蛀繭綻茲生灑獻(xiàn)零粉皿什究尼叼婦滇舅登葷乓讕（3）冰上超聲處理細(xì)胞，每次超聲2s，間隔3s，約10-20次。westernblotting蛋