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《小鼠組蛋白去乙?；冈噭┖姓f明書》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、小鼠組蛋白去乙酰化酶(HDAC)ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本：血清或血漿?試驗原理：HDAC試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(ELISA).已知HDAC濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將HDAC和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中HDAC的濃度呈比例關(guān)系。?試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板(
2、96T)半塊板(48T)即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品：400pmol/L1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進(jìn)行稀稀空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素標(biāo)記的抗HDAC抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進(jìn)行稀釋底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型終止液1瓶(6.
3、0ml)1瓶(3.0ml)即用型標(biāo)本稀釋液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型?自備材料1．?蒸餾水。2．?加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3．?振蕩器及磁力攪拌器等。?安全性1．?避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。2．?實(shí)驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3．?不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。?操作注意事項1．?試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。2．?實(shí)驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封
4、保存，以免變質(zhì)。3．?不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4．?使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。5．?使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6．?洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7．?底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。8．?加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。9．?按照說明書
5、中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。?樣品收集、處理及保存方法1、?血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、?血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、?細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、?組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液5、?保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避
6、免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。?試劑的準(zhǔn)備1．?標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：400pmol/L(6號標(biāo)準(zhǔn)品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。200pmol/L(5號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100pmol/L(4號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50pmol/L(3號標(biāo)準(zhǔn)
7、品)100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25pmol/L(2號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液12.5pmol/L(1號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0pmol/L(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。?2．?洗滌緩沖液(50×)的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。??操作步驟1．?使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2．?根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做
8、復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。3．?加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。4．?甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩
