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《反相高效液相色譜法測(cè)定對(duì)羥基苯甲酸酯類.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、對(duì)羥基苯甲酸酯類混合物的反相高效液相色譜測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康蘑睂W(xué)習(xí)高效液相色譜用保留值定性和用歸一化法定量的技術(shù)。⒉熟悉高效液相色譜分析操作。3.掌握用高效液相色譜法測(cè)定食品中防腐劑的含量。二、實(shí)驗(yàn)原理高效液相色譜儀是一種色譜分析儀器，主要用于有機(jī)化合物的分析，可以對(duì)已知80%左右的有機(jī)化合物進(jìn)行分離和分析。特別適用于高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物以及生物活性物質(zhì)的分離和分析。液相色譜儀在醫(yī)藥、食品、農(nóng)業(yè)、生命科學(xué)、化工和環(huán)保等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。液相色譜分析方法實(shí)質(zhì)上是一種物理化學(xué)分析方法，又稱色層法或?qū)游?/p>
2、法。它是利用不同物質(zhì)在兩相（固定相和流動(dòng)相）中具有不同的分配系數(shù)和吸附能力及其他親和作用性能的差異為分離依據(jù)，當(dāng)混合物中各組分隨流動(dòng)相移動(dòng)時(shí)，在兩相中反復(fù)進(jìn)行多次分配，從而使各組分得到分離。流動(dòng)相為液體的色譜分析叫做液相色譜分析。根據(jù)分離原理的差異，液相色譜通常分為以下幾種類型：液固吸附色譜、液液分配色譜、離子交換色譜和離子對(duì)色譜、凝膠色譜。在對(duì)羥基苯甲酸酯類混合物中含有對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯和對(duì)羥基苯甲酸丁酯，它們都是強(qiáng)極性化合物，可采用反相液相色譜進(jìn)行分析，選用非極性的C-18烷基鍵
3、合相作固定相，甲醇的水溶液作流動(dòng)相。在一定的色譜條件下，酯類各組分的保留值是恒定的，因而在同樣條件下，記錄純酯類各組分和未知樣品的色譜圖，將測(cè)得的未知樣品的各組分保留時(shí)間與已知純酯類各組分保留時(shí)間對(duì)照，便可確定未知樣品中各組分存在與否。這種利用純物質(zhì)對(duì)照定性分析的方法適用于來(lái)源已知且組分簡(jiǎn)單的混合物。本實(shí)驗(yàn)采用歸一化法定量。歸一化法適用條件及計(jì)算公式與氣相色譜法相同：Ci（%）=(fiAi)/(ΣfiAi)在對(duì)羥基苯甲酸酯類混合物屬同系物，具有相同的生色團(tuán)和助色團(tuán)，因此紫外光度檢測(cè)器測(cè)量時(shí)，它們的校正因子相同，故上式
4、便可檢測(cè)為Ci（%）=Ai/ΣAi×100％三、儀器和試劑儀器：高效液相色譜儀LC-20aT試劑：對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯、甲醇、水（GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水）、乙酸銨（分析純）實(shí)驗(yàn)條件1色譜柱：長(zhǎng)15cm、內(nèi)徑3mm，裝填C-18烷基鍵合相、顆粒度為10um的固定相。2流動(dòng)相：甲醇+20mmol/L乙酸銨溶液=60+40（體積比）。3檢測(cè)器：紫外光度檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)掃描范圍210nm—400nm，定量波長(zhǎng)256nm。4進(jìn)樣量：10uL。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、溶液的配制標(biāo)準(zhǔn)
5、儲(chǔ)備液：分別于4個(gè)100mL容量瓶中，配制濃度為1000ug/mL的上述4種酯類化合物的甲醇溶液。分別稱取4種酯類0.1000g于50mL燒杯中溶解然后定容到100mL容量瓶中。標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別取上述4種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于4個(gè)10mL比色管中，配制濃度均為10ug/mL的4種酯類化合物的甲醇溶液，搖勻備用。取5mL濃度為1000ug/mL的上述4種酯類化合物的甲醇溶液稀釋到100mL容量瓶中得濃度為50ug/mL的4種酯類化合物的甲醇溶液；分別取2mL濃度為50ug/mL的上述4種酯類化合物的甲醇溶液于10mL比色管中定容
6、得到10ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。標(biāo)準(zhǔn)混合工作液：在一個(gè)10mL的比色管中，分別取2mL濃度為50ug/mL的4種酯類化合物的甲醇溶液定容得到濃度均為10ug/mL的酯類混合的甲醇溶液，混勻備用。2、實(shí)驗(yàn)操作（1）將配制好的流動(dòng)相甲醇水溶液置于超聲波發(fā)生器上，脫氣5min。（2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件，按照儀器說(shuō)明書(shū)操作步驟將儀器調(diào)節(jié)至進(jìn)樣狀態(tài)，待儀器液路和電路系統(tǒng)達(dá)到平衡，記錄儀基線呈平直時(shí)，即可進(jìn)樣。（3）依次分別吸取10uL四種標(biāo)準(zhǔn)工作液、標(biāo)準(zhǔn)混合工作液和未知試液進(jìn)樣，記錄各色譜圖，并各重復(fù)兩次。五、數(shù)據(jù)及處理⒈記錄實(shí)驗(yàn)條
7、件，保存實(shí)驗(yàn)資料。⒉測(cè)量4種在對(duì)羥基苯甲酸酯類化合物色譜圖的保留時(shí)間tR,并填于下表中。組分tR/min123平均對(duì)羥基苯甲酸甲酯對(duì)羥基苯甲酸乙酯對(duì)羥基苯甲酸丙酯對(duì)羥基苯甲酸丁酯⒊一次測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)混合物色譜圖上各色譜峰的保留時(shí)間tR，然后與上表tR中對(duì)照。確定各色譜峰為何種化合物所產(chǎn)生，填于下表中。色譜峰tR/min相應(yīng)化合物的名稱123平均值峰1峰2峰3峰4⒋測(cè)量未知試樣色譜圖上各組分的峰高h(yuǎn)、峰寬Y，計(jì)算各組分峰面積A及其含量ci（%），并將數(shù)據(jù)列于下表中。組分次數(shù)h/mauYminA/mau*s平均Ai/mau*s
8、平均ci/%對(duì)羥基苯甲酸甲酯123對(duì)羥基苯甲酸乙酯123對(duì)羥基苯甲酸丙酯123對(duì)羥基苯甲酸丁酯123六、注意事項(xiàng)⒈對(duì)色譜柱來(lái)說(shuō)，在通常的分析條件下，可長(zhǎng)時(shí)間使用，但如發(fā)生雜物吸附或由微粒引起的堵塞時(shí)，則其性能大大降低，為延長(zhǎng)色譜柱壽命建議使用保護(hù)柱。⒉若直接注入渾濁的試樣或含有微粒的試樣，則會(huì)成為流路或色譜柱堵塞的原因，請(qǐng)用0.2～0.5um左
