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時間:2017-12-28
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1、植物活性多糖的提取方法有多種,在水提醇沉的基礎上,常采用酶解、微波、超聲波,膜處理和CO<2>超臨界萃取等方法進行輔助提取或精制.最常用的還是水提醇沉法.舉例:蒽酮比色法,具體步驟一、儀器、試劑和材料1.儀器:電子天平,超聲波清洗器,電熱恒溫水浴鍋,抽濾設備,分光光度計,容量瓶,刻度吸管等2.試劑:(1)葡萄糖標準液:l00μg/mL(2)濃硫酸(3)蒽酮試劑:0.2g蒽酮溶于100mL濃H2SO4中。當日配制使用。3.材料:甜高粱,甘草二.操作步驟1.葡萄糖標準曲線的制作取7支大試管,按下表數據配制
2、一系列不同濃度的葡萄糖溶液:管號1234567葡萄糖標準液(mL)00.10.20.30.40.60.8蒸餾水(mL)10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量(μg)0102030406080在每支試管中立即加入蒽酮試劑4.0mL,迅速浸于冰水浴中冷卻,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加蓋,以防蒸發(fā)。自水浴沸騰起計時,準確煮沸l(wèi)0min,取出,用冰浴冷卻至室溫,在620nm波長下以第一管為空白,迅速測其余各管吸光值。以標準葡萄糖含量(μg)為橫坐標,以吸光值為縱坐標,繪出標準曲線。2.植物樣品
3、中可溶性糖的提取:將樣品粉碎,105oC烘干至恒重,精確稱取1~5g,置于50mL三角瓶中,加沸水25mL,加蓋,超聲提取10min,冷卻后過濾(抽濾),殘渣用沸蒸餾水反復洗滌并過濾(抽濾),濾液收集在50mL容量瓶中,定容至刻度,得可溶性糖的提取液。3.稀釋:吸取提取液2mL,置于另一50mL容量瓶中,以蒸餾水定容,搖勻。4.測定:吸取1mL已稀釋的提取液于試管中,加入4.0mL蒽酮試劑,平行三份;空白管以等量蒸餾水替代提取液。以下操作同標準曲線制作。根據A620平均值在標準曲線上查出葡萄糖的含量(
4、μg)。三、結果處理:C×V總×D樣品含糖量(%)=—————————————×100%W×V測×106其中:C——在標準曲線上查出的糖含量(μg),V總——提取液總體積(mL),V測——測定時取用體積(mL),D——稀釋倍數,W——樣品重量(g),106——樣品重量單位由g換算成μg的倍數
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