液體乳中三聚氰胺的快速檢測,膠體金免疫層析法.doc

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1、液體乳中三聚氰胺的快速檢測,膠體金免疫層析法　　附件7　　液體乳中三聚氰胺的快速檢測　　膠體金免疫層析法　　(KJ201907)　　1范圍　　本方法規(guī)定了液體乳中三聚氰胺的膠體金免疫層析快速檢測方法?！　”痉椒ㄟm用于巴氏殺菌乳、滅菌乳、調(diào)制乳和發(fā)酵乳中三聚氰胺的快速測定?！　?原理　　本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中的三聚氰胺與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和試紙條或檢測卡中檢測線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與控制線（C線）顏色深淺比較，對樣品中三聚氰胺進(jìn)行定性判定。　　3

2、試劑和材料　　除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水?！　?.1試劑　　3.1.1　　甲醇?！　?.1.2　　三羥甲基氨基甲烷（Tris）?！　?.1.3　　1mol/L鹽酸：移取83mL濃鹽酸，加入900mL水中，定容至1L?！　?.1.4　　甲醇水溶液：準(zhǔn)確量取50mL甲醇和50mL水，混勻后備用?！　?.1.5　　稀釋液：準(zhǔn)確稱取6.05gTris（3.1.2）和8.5g1mol/L鹽酸（3.1.3），加水定容至1L，混勻后備用。　　3.2參考物質(zhì)　　參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱

3、、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1，純度≥99%?！　”?三聚氰胺參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量　　中文名稱　　英文名稱　　CAS登錄號　　分子式　　相對分子質(zhì)量　　三聚氰胺　　Melamine　　108-78-1　　C3H6N6　　126.12　　注：或等同可溯源物質(zhì)?！　?.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制　　三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1000μg/mL）：精密稱取適量三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（3.2），置于10mL容量瓶中，用甲醇水溶液（3.1.4）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1000μg/mL的三

4、聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液；或可直接購三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液。4℃避光保存?zhèn)溆?，有效?個月。　　3.4三聚氰胺膠體金免疫層析試劑盒　　3.4.1金標(biāo)微孔（含膠體金標(biāo)記的特異性抗體）?！　?.4.2試紙條或檢測卡?！　?儀器和設(shè)備　　4.1移液器：200μL、1000μL和5mL?！　?.2渦旋混合器?！　?.3電子天平：感量為0.01g?！　?.4環(huán)境條件：溫度15℃~35℃，濕度≤80%?！　?分析步驟　　5.1試樣制備　　取適量有代表性樣品充分混勻。　　5.2試樣提取　　準(zhǔn)確稱取樣品0.5g于離心管中，加入5mL稀釋液（3.1

5、.5），渦旋混勻提取5min，即得待測液。　　注：試樣提取過程可按照試劑盒說明書，不做限定?！　?.3測定步驟　　5.3.1試紙條與金標(biāo)微孔測定步驟　　吸取150~200μL樣品待測液于金標(biāo)微孔（3.4.1）中，抽吸5~10次使混合均勻，不要有氣泡，40℃溫育3min，將檢測試紙條（3.4.2）樣品端垂直向下插入金標(biāo)微孔中，40℃溫育5min，從微孔中取出試紙條，進(jìn)行結(jié)果判定?！　?.3.2檢測卡測定步驟　　吸取150-200μL樣品待測液于檢測卡加樣孔（3.4.2）中，室溫反應(yīng)3-5min，進(jìn)行結(jié)果判定?！　?.4質(zhì)

6、控試驗　　每批樣品應(yīng)同時進(jìn)行空白試驗和加標(biāo)質(zhì)控試驗?！　?.4.1空白試驗　　稱取空白試樣，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作?！　?.4.2加標(biāo)質(zhì)控試驗　　準(zhǔn)確稱取空白試樣100g（精確至0.01g）置于100mL玻璃溶液瓶中，加入250μL三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/mL）（3.3），使試樣中三聚氰胺濃度為2.5mg/kg，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作?！　∽ⅲ嚎蓞⒖紭?biāo)準(zhǔn)品的說明書配置操作?！　?結(jié)果判定要求　　通過對比控制線（C線）和檢測線（T線）的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。目視結(jié)果判讀如圖1?！　?.

7、1無效　　控制線（C線）不顯色，表明不正確操作或試紙條/檢測卡無效?！　?.2陽性結(jié)果　　6.2.1消線法　　檢測線（T線）不顯色，控制線（C線）顯色，表明樣品中三聚氰胺含量高于方法檢測限，判定為陽性（如圖1試紙條/檢測卡目視判定示意圖）?！　?.2.2比色法　　檢測線（T線）顏色比控制線（C線）顏色淺或幾乎不顯色，表明樣品中三聚氰胺含量高于方法檢測限，判定為陽性（如圖1試紙條/檢測卡目視判定示意圖）。　　6.3陰性結(jié)果　　6.3.1消線法　　檢測線（T線）、控制線（C線）均顯色，表明樣品中三聚氰胺含量低于方法檢測限，

8、判定為陰性（如圖1試紙條/檢測卡目視判定示意圖）。　　6.3.2比色法　　檢測線（T線）顏色比控制線（C線）顏色深或者檢測線（T線）顏色與控制線（C線）顏色相當(dāng)，表明樣品中三聚氰胺含量低于方法檢測限，判定為陰性（如圖1試紙條/檢測卡目視判定示意圖）?！　≡嚰垪l　　手持端　　C線　　T線　　樣品端　　檢測卡　　加樣孔　　T線　　C線