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《液體乳中三聚氰胺的快速檢測,膠體金免疫層析法.doc》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、液體乳中三聚氰胺的快速檢測,膠體金免疫層析法 附件7 液體乳中三聚氰胺的快速檢測 膠體金免疫層析法 (KJ201907) 1范圍 本方法規(guī)定了液體乳中三聚氰胺的膠體金免疫層析快速檢測方法?! ”痉椒ㄟm用于巴氏殺菌乳、滅菌乳、調(diào)制乳和發(fā)酵乳中三聚氰胺的快速測定?! ?原理 本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中的三聚氰胺與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合,抑制抗體和試紙條或檢測卡中檢測線(T線)上抗原的結(jié)合,從而導(dǎo)致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與控制線(C線)顏色深淺比較,對樣品中三聚氰胺進(jìn)行定性判定。 3
2、試劑和材料 除另有規(guī)定外,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的二級水?! ?.1試劑 3.1.1 甲醇?! ?.1.2 三羥甲基氨基甲烷(Tris)?! ?.1.3 1mol/L鹽酸:移取83mL濃鹽酸,加入900mL水中,定容至1L?! ?.1.4 甲醇水溶液:準(zhǔn)確量取50mL甲醇和50mL水,混勻后備用?! ?.1.5 稀釋液:準(zhǔn)確稱取6.05gTris(3.1.2)和8.5g1mol/L鹽酸(3.1.3),加水定容至1L,混勻后備用。 3.2參考物質(zhì) 參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱
3、、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1,純度≥99%?! ”?三聚氰胺參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量 中文名稱 英文名稱 CAS登錄號 分子式 相對分子質(zhì)量 三聚氰胺 Melamine 108-78-1 C3H6N6 126.12 注:或等同可溯源物質(zhì)?! ?.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1000μg/mL):精密稱取適量三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品(3.2),置于10mL容量瓶中,用甲醇水溶液(3.1.4)溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成濃度為1000μg/mL的三
4、聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液;或可直接購三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液。4℃避光保存?zhèn)溆?,有效?個月。 3.4三聚氰胺膠體金免疫層析試劑盒 3.4.1金標(biāo)微孔(含膠體金標(biāo)記的特異性抗體)?! ?.4.2試紙條或檢測卡?! ?儀器和設(shè)備 4.1移液器:200μL、1000μL和5mL?! ?.2渦旋混合器?! ?.3電子天平:感量為0.01g?! ?.4環(huán)境條件:溫度15℃~35℃,濕度≤80%?! ?分析步驟 5.1試樣制備 取適量有代表性樣品充分混勻。 5.2試樣提取 準(zhǔn)確稱取樣品0.5g于離心管中,加入5mL稀釋液(3.1
5、.5),渦旋混勻提取5min,即得待測液。 注:試樣提取過程可按照試劑盒說明書,不做限定?! ?.3測定步驟 5.3.1試紙條與金標(biāo)微孔測定步驟 吸取150~200μL樣品待測液于金標(biāo)微孔(3.4.1)中,抽吸5~10次使混合均勻,不要有氣泡,40℃溫育3min,將檢測試紙條(3.4.2)樣品端垂直向下插入金標(biāo)微孔中,40℃溫育5min,從微孔中取出試紙條,進(jìn)行結(jié)果判定?! ?.3.2檢測卡測定步驟 吸取150-200μL樣品待測液于檢測卡加樣孔(3.4.2)中,室溫反應(yīng)3-5min,進(jìn)行結(jié)果判定?! ?.4質(zhì)
6、控試驗 每批樣品應(yīng)同時進(jìn)行空白試驗和加標(biāo)質(zhì)控試驗?! ?.4.1空白試驗 稱取空白試樣,按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作?! ?.4.2加標(biāo)質(zhì)控試驗 準(zhǔn)確稱取空白試樣100g(精確至0.01g)置于100mL玻璃溶液瓶中,加入250μL三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/mL)(3.3),使試樣中三聚氰胺濃度為2.5mg/kg,按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作?! ∽ⅲ嚎蓞⒖紭?biāo)準(zhǔn)品的說明書配置操作?! ?結(jié)果判定要求 通過對比控制線(C線)和檢測線(T線)的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。目視結(jié)果判讀如圖1?! ?.
7、1無效 控制線(C線)不顯色,表明不正確操作或試紙條/檢測卡無效?! ?.2陽性結(jié)果 6.2.1消線法 檢測線(T線)不顯色,控制線(C線)顯色,表明樣品中三聚氰胺含量高于方法檢測限,判定為陽性(如圖1試紙條/檢測卡目視判定示意圖)?! ?.2.2比色法 檢測線(T線)顏色比控制線(C線)顏色淺或幾乎不顯色,表明樣品中三聚氰胺含量高于方法檢測限,判定為陽性(如圖1試紙條/檢測卡目視判定示意圖)。 6.3陰性結(jié)果 6.3.1消線法 檢測線(T線)、控制線(C線)均顯色,表明樣品中三聚氰胺含量低于方法檢測限,
8、判定為陰性(如圖1試紙條/檢測卡目視判定示意圖)。 6.3.2比色法 檢測線(T線)顏色比控制線(C線)顏色深或者檢測線(T線)顏色與控制線(C線)顏色相當(dāng),表明樣品中三聚氰胺含量低于方法檢測限,判定為陰性(如圖1試紙條/檢測卡目視判定示意圖)?! ≡嚰垪l 手持端 C線 T線 樣品端 檢測卡 加樣孔 T線 C線