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1、高碘酸氧化和Smith降解原理：高碘酸氧化和Smith降解高碘酸可性斷裂糖分子中的二基或三基處,生成相的多糖,甲或甲酸.反定量行,每開裂1個(gè)C—C消耗1分子高碘酸.通定高碘酸的消耗量及甲酸的放量,可以判斷糖苷的位置,直多糖的聚合度,分支多糖的分支數(shù)等.Smith降解是將高碘酸氧化物原后酸水解,再定水解物,從而推斷糖苷的位置與分支點(diǎn)等.以葡萄糖例,以1—2或1—4位合的糖基高碘酸氧化,平均每個(gè)糖基消耗1分子高碘酸,且無甲酸放;1—3位合的糖基不被高碘酸氧化;1—6位合的糖基或非原末端糖基高碘酸氧化,消耗2分子高碘酸同放1分子甲酸.準(zhǔn)物品：容量瓶（25m
2、l*2，50ml*2；茶色好）、、堿式滴定管、定量；高碘酸、乙二醇、溴甲酚(紅)紫指示、0.005NNaOH(由0.1NNaOH稀20倍制得，使用前用苯二甲酸定)、NaBH4或KBH4、50%HAc、1MH2SO4、BaCO3、乙醇。步：（1）準(zhǔn)確配置30mMNaIO450ml（320.8mgNaIO4，定容至50ml），用包好避光，取0.1ml稀至25ml，223nm定吸光大于0.6方可使用。（注：此溶液必用配。）（2）準(zhǔn)確稱取糖50mg（下準(zhǔn)確量），用少量水溶解于50ml容量瓶中，然后加入30mMNaIO425ml，蒸水定容，使NaIO4度15m
3、M。用包好避光，放置在低溫暗反，隔(0、6、12、24、36、48、60??小)取0.1ml，用蒸水稀250倍，以蒸水作空白照，在223nm波光密度，直到光密度恒定止。（3）同將剩余的30mMNaIO4稀15mM，與反品同放置作照，待反束取出0.1ml，稀250倍后，用蒸水按不同比例稀，每度三個(gè)重復(fù)，定223nm的光密度，以O(shè)D坐，NaIO4度橫坐，制作準(zhǔn)曲。NaIO4濃度03691215（Mm）蒸水（ml）543210NaIO4溶液（ml）012345（4）通準(zhǔn)曲，算出高碘酸的消耗量。消耗高碘酸的量（mmol）=(反前高碘酸度-反后高碘酸度)*反體
4、（5）取2ml上述氧化液，加1滴溴甲酚(紅)紫作指示，用0.005NNaOH溶液滴定，算得甲酸生成量。甲酸生成量（mmol）=（NaOH的準(zhǔn)確度*滴定用的體/2ml）*反體（6）加乙二醇止高碘酸氧化反。流水及蒸水各透析24小。至10ml，加入KBH470mg原夜。用50%乙酸中和至pH為67，流水及蒸水各透析24小。取1/3干燥后做完全酸水解和GC分析，剩余部分行Smith降解。1（2）加入等體積的1MH2SO4，25℃水解40小時(shí)，BaCO3中和至pH為6，用定量濾紙過濾，濾液用蒸餾水透析8小時(shí)，袋外部分干燥做GC分析，濾液再用流水蒸餾水各透析24
5、小時(shí)，袋內(nèi)部分水浴濃縮到適當(dāng)體積，加乙醇醇析，離心，上清及沉淀部分干燥后分別做完全酸水解和GC分析。高碘酸氧化、Smith降解實(shí)驗(yàn)原理：高碘酸氧化和Smith降解：高碘酸可選擇性斷裂糖分子中的鄰二羥基或鄰三羥基處,生成相應(yīng)的多糖醛,甲醛或甲酸.反應(yīng)定量進(jìn)行,每開裂1個(gè)C—C鍵消耗1分子高碘酸.通過測定高碘酸的消耗量及甲酸的釋放量,可以判斷糖苷鍵的位置,直鏈多糖的聚合度,分支多糖的分支數(shù)等.Smith降解是將高碘酸氧化產(chǎn)物還原后酸水解,再鑒定水解產(chǎn)物,從而推斷糖苷鍵的位置與分支點(diǎn)等.以葡萄糖為例,以1—2或1—4位鍵合的糖基經(jīng)高碘酸氧化,平均每個(gè)糖基消
6、耗1分子高碘酸,且無甲酸釋放;1—3位鍵合的糖基不被高碘酸氧化;1—6位鍵合的糖基或非還原末端糖基經(jīng)高碘酸氧化,消耗2分子高碘酸同時(shí)釋放1分子甲酸.。高碘酸氧化是一種選擇性的氧化反應(yīng)，它只能作用于多糖分子中連二羥基或連三羥基處。當(dāng)連二羥基的C-C鍵被氧化斷開后，產(chǎn)生相應(yīng)的醛；當(dāng)連三羥基的C-C鍵被氧化斷開后，產(chǎn)生甲酸及相應(yīng)的醛。此反應(yīng)定量進(jìn)行，每斷開1molC-C鍵，消耗1mol高碘酸，每生成1mol甲酸對應(yīng)消耗2mol高碘酸。因此，通過測定高碘酸消耗量及甲酸生成量，便可以判斷糖苷鍵的位置、直鏈多糖的聚合度及支鏈多糖的分支數(shù)目等。高碘酸氧化產(chǎn)物經(jīng)硼氫
7、化鉀還原，得到的多糖醇用稀酸在溫和條件下水解，可發(fā)生特異性降解，稱為Smith降解。Smith降解的特點(diǎn)是只打斷被高碘酸破壞的糖苷鍵，而未被高碘酸氧化的糖殘基仍連在糖鏈上。這樣，多糖醇經(jīng)Smith降解，就可以得到小分子的多元醇和未被破壞的多糖或寡糖片斷，對這些產(chǎn)物進(jìn)行分析，便可以推斷出糖苷鍵的鍵型及其位置。下面以各種鍵型連接的葡聚糖為例，反應(yīng)式如下：以1→2或1→2,6位糖苷鍵連接的葡聚糖反應(yīng)式：CHOHCH2OHCH2OH2CH2OHO-OOH+OHIO4KBH4OHCCH2OH2CHOHOHO...OHCO...HOH2CO...O...O...
8、O...CH2OH以1→或1→6位糖苷鍵連接的葡聚糖反應(yīng)式：2CH2O...CHOHCH2OHO2O+-OK
