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《糖鏈的序列測定_高碘酸氧化法及smith降解法》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、糖鏈的序列測定—高碘酸氧化法及Smith降解法實驗>生化分子>糖鏈的序列測定—高碘酸氧化法(http://www.bbioo.com/experiment/15-1655-1.html)高碘酸氧化和Smith降解高碘酸可選擇性斷裂糖分子中的鄰二羥基或鄰三羥基處,生成相應的多糖醛,甲醛或甲酸.反應定量進行,每開裂1個C—C鍵消耗1分子高碘酸.通過測定高碘酸的消耗量及甲酸的釋放量,可以判斷糖苷鍵的位置,直鏈多糖的聚合度,分支多糖的分支數等.Smith降解是將高碘酸氧化產物還原后酸水解,再鑒定水解產物,從而推斷糖苷鍵的位置與分支點等.以葡萄糖為例
2、,以1—2或1—4位鍵合的糖基經高碘酸氧化,平均每個糖基消耗1分子高碘酸,且無甲酸釋放;1—3位鍵合的糖基不被高碘酸氧化;1—6位鍵合的糖基或非還原末端糖基經高碘酸氧化,消耗2分子高碘酸同時釋放1分子甲酸.【實驗原理】高碘酸可以選擇性地氧化和斷裂糖分子中連二羥基或連三羥基處，生成相應的多糖醛、甲醛或甲酸。反應定量地進行，每開裂—個C-C鍵消耗一分子高碘酸。通過測定高碘酸消耗量及甲酸的釋放量，可以判斷多糖分子中糖苷鍵的位置、類型、多糖的分枝數目和取代情況等?！緦嶒灢牧稀?.實驗器材紫外分光光度計。2.實驗試劑(1)溴甲酚藍指示劑:0.1克溴甲
3、酚藍溶于250ml蒸餾水中（含1.43毫升0.1mol/L氫氧化鈉）。(2)30mmol/L高碘酸鈉溶液。高碘酸鈉基本信息中文名稱:高碘酸鈉英文名稱:Sodiumperiodate中文別名:過碘酸鈉;偏高碘酸鈉英文別名:SodiumMetaperiodate;SodiumMetapriodate;Sodium(Meta)Periodate;SodiumTetroxoiodate(Vii);SodiummetaperiodateCAS:7790-28-5[1]6EINECS:232-197-6分子式:NaIO4分子量:213.8918高碘酸簡
4、介中文名稱：高碘酸英文名稱：periodicacid??正高碘酸英文別名:pentahydroxy-lambda~5~-iodaneoxide[1]CASNo.：10450-60-9分子式：H5IO6分子量：227.94理化特性：主要成分：純品外觀與性狀：無色或白色結晶，無臭，有潮解性。熔點(℃)：122沸點(℃)：140(分解)相對蒸氣密度(空氣=1)：7.9溶解性：溶于水、乙醇，微溶于乙醚。主要用途：用作氧化劑。高碘酸鈉制備：氯氣氧化法將碘在水介質中，通入氯氣進行氧化生成高碘酸，經分離雜質后，加入氫氧化鈉溶液中和至pH2～3，生成高碘酸
5、鈉溶液，再經提純、分離雜質、蒸發(fā)濃縮、冷卻結晶、離心分離、干燥，制得高碘酸鈉成品，其反應方程式：HIO4+NaOH→NaIO4+H2O(3)乙二醇。(4)0.01mol/L氫氧化鈉溶液?！緦嶒灢僮鳌?.制作標準曲線：取6支干燥試管，按下表操作管號012345高碘酸鈉（ml）00.51.01.52.04.06蒸餾水（ml）4.03.53.02.52.00各取0.1ml，定容至25ml，在223nm處測定光密度A223?橫坐標為高碘酸鈉毫摩爾數，縱坐標為光密度值，繪制標準曲線。2.樣品測定稱取多糖樣品25mg，用少量水溶解，加入30mmol/L
6、高碘酸鈉溶液,定容至25ml，置于暗處,室溫下進行反應，于0，6，12，24，36，48…小時間隔取樣0.1ml，蒸餾水稀釋250倍后，使用紫外分光光度計在223nm處測定光密度。至光密度值達一穩(wěn)定值時，加乙二醇破壞過量的高碘酸以終止反應。由此光密度值根據標準曲線計算出高碘酸的消耗量。取2ml上述反應溶液，測定甲酸的生成量。剩余部分進行Smith降解。3.甲酸測定：取2ml上述反應溶液，加一滴溴甲酚藍作指示劑，用0.01mol/L氫氧化鈉溶液滴定甲酸的釋放量。【注意事項】為避免發(fā)生超氧化，反應溶液的pH值應控制在3~5，而且一定要在低溫、避
7、光處進行實驗>生化分子>糖鏈的序列測定—Smith降解法(http://www.bbioo.com/experiment/15-1657-1.html)Smith降解是將高碘酸氧化產物用硼氫化合物(如硼氫化鉀或硼氫化鈉)還原成穩(wěn)定的多羥基化合物。然后進行適度的酸水解，用紙層析鑒定水解產物，由水解產物可以推斷多糖各組分的連接方式及次序。以葡聚糖為例，其反應式如下圖：以1→2位鍵合的糖基經高碘酸氧化，平均每個糖基僅消…Smith降解是將高碘酸氧化產物用硼氫化合物(如硼氫化鉀或硼氫化鈉)還原成穩(wěn)定的多羥基化合物。6然后進行適度的酸水解，用紙層析鑒
8、定水解產物，由水解產物可以推斷多糖各組分的連接方式及次序。以葡聚糖為例，其反應式如下圖：以1→2位鍵合的糖基經高碘酸氧化，平均每個糖基僅消耗一分子高碘酸，并且無甲酸釋放；Smit
