糖鏈的序列測定—Smith降解法.doc

《糖鏈的序列測定—Smith降解法.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、個人收集整理勿做商業(yè)用途糖鏈的序列測定—Smith降解法摘要：Smith降解是將高碘酸氧化產(chǎn)物用硼氫化合物(如硼氫化鉀或硼氫化鈉）還原成穩(wěn)定的多羥基化合物。然后進行適度的酸水解,用紙層析鑒定水解產(chǎn)物，由水解產(chǎn)物可以推斷多糖各組分的連接方式及次序.以葡聚糖為例，其反應(yīng)式如下圖:以1→2位鍵合的糖基經(jīng)高碘酸氧化，平均每個糖基僅消耗一分子高碘酸,并且無甲酸釋放;Smith降解后產(chǎn)生甘油。以1→4位鍵合的糖基經(jīng)高碘酸氧化，平均每個糖基僅消耗一分子高碘酸，并且無甲酸釋放;Smith降解后產(chǎn)生赤蘚醇。以1→3位鍵

2、和的糖基不被高碘酸氧化；Smith降解后仍為原來糖。以1→6位鍵和的糖基或非還原末端基（1→6)經(jīng)高碘酸氧化，消耗二分子高碘酸，同時釋放一分子甲酸;Smith降解后產(chǎn)生甘油。Smith降解是將高碘酸氧化產(chǎn)物用硼氫化合物（如硼氫化鉀或硼氫化鈉)還原成穩(wěn)定的多羥基化合物。然后進行適度的酸水解，用紙層析鑒定水解產(chǎn)物,由水解產(chǎn)物可以推斷多糖各組分的連接方式及次序。以葡聚糖為例，其反應(yīng)式如下圖：以1→2位鍵合的糖基經(jīng)高碘酸氧化，平均每個糖基僅消耗一分子高碘酸，并且無甲酸釋放;Smith降解后產(chǎn)生甘油。以1→4位

3、鍵合的糖基經(jīng)高碘酸氧化，平均每個糖基僅消耗一分子高碘酸，并且無甲酸釋放；Smith降解后產(chǎn)生赤蘚醇。個人收集整理勿做商業(yè)用途以1→3位鍵和的糖基不被高碘酸氧化;Smith降解后仍為原來糖。以1→6位鍵和的糖基或非還原末端基（1→6）經(jīng)高碘酸氧化,消耗二分子高碘酸,同時釋放一分子甲酸；Smith降解后產(chǎn)生甘油.本實驗通過紙層析檢測終產(chǎn)物中的甘油、赤蘚醇和糖.【實驗材料】0。1mol/L醋酸.2mol/L硫酸.個人收集整理勿做商業(yè)用途硼氫化鉀。紙層析試劑及器材：除顯色劑外,同實驗二。硝酸銀顯色劑:A：16

4、%硝酸銀水溶液：丙酮為1：9（V/V）。B：1％NaOH乙醇溶液(W/V）.C：6mol/L氫氧化銨?！緦嶒灢僮鳌?。還原和水解高碘酸氧化后經(jīng)乙二醇處理的溶液對流水透析48小時，蒸餾水透析24小時，于40℃以下減壓濃縮至10ml左右，加入70mg硼氫化鉀于室溫、暗處攪拌18小時～24小時以還原多糖醛.用0.1mol／L醋酸中和至pH6~7，對流水透析48小時,蒸餾水透析24小時，減壓蒸干，加1mol／L硫酸2ml，封管，100℃水解8小時，用碳酸鋇粉末中和，定量濾紙過濾，濾液減壓濃縮后，通過紙層析方法

5、檢測.2.紙層析操作詳見實驗2（單糖組成分析）.展層后,將濾紙取出，自然干燥,噴上試劑A,自然干燥，將濾紙浸入試劑B中，待斑點顯出后,再浸入試劑C中以洗去濾紙上的氧化銀，然后用水沖洗1小時左右，風干。以正丁醇：乙酸:水=4：l：5為展層劑時,甘油的Rf為:0.48，赤蘚醇的Rf為：0。35。