豬流行性腹瀉病毒TaqMan熒光定量RTPCR檢測(cè)方法的建立及其初步應(yīng)用

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1、學(xué)校名稱:華中農(nóng)!№大學(xué)分類號(hào):?jiǎn)挝淮a:10504密級(jí):華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬流行性腹瀉病毒TaqMan熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立及其初步應(yīng)用DevelopmentandpreliminaryapplicationofTaqManfluorescencequantitativerealtimeRT-PCRofPorcine●l●1‘■●eplOemicdiarrneaVlrus研究生:學(xué)號(hào):指導(dǎo)教師:王玄珂2011302120029何啟蓋徐高原學(xué)位類型:獸醫(yī)碩士領(lǐng)域:教授博士華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院.動(dòng)物醫(yī)學(xué)院中國(guó)·武漢Collegeof

2、AnimalSciencesandTechnologyHuazhongAgriculturalUniversityWuhan,China本論文受到下述項(xiàng)目資助:廣東省中國(guó)科學(xué)院全面戰(zhàn)略合作項(xiàng)目:豬病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查與三聯(lián)活疫苗研制國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31272572)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文是否保密奄如需保密,解密時(shí)間年月目獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果,也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)

3、大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料,指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說(shuō)明,并表示了謝意。研究生簽名:王杰珂時(shí)間:加多年鄉(xiāng)月朔日學(xué)位論文使用授權(quán)書(shū)本人完全了解華中農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本;學(xué)校有權(quán)保存提交論文的印刷版和電子版,并提供目錄檢索和閱覽服務(wù),可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本人同意華中農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容,為存在館際合作關(guān)系的兄弟高校用戶提供文獻(xiàn)傳

4、遞和交換服務(wù),同時(shí)本人保留在其他媒體發(fā)表論文的權(quán)力.注:保密學(xué)位論文(印涉及技術(shù)秘密、商業(yè)秘密或申請(qǐng)專利等潛在需要提交保密的論文)在解密后適用于本授權(quán)書(shū).學(xué)位論黼始王玄珂攤名:傅簽名日期:即l>年歲月≯8日簽名日期:叫年r月訝日豬流行性腹瀉病毒TaqMan熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用目錄摘要????????????????????????????????????????????..iAbstract.???..???.?.?.?.?.?.?..??..?.?.?.?..??.?.?..?..?.?.??.??.???...iii縮略語(yǔ)表

5、(Abbreviation)?????????????????????????一v第一章前言??????????????????????????????11.1PEDV病原結(jié)構(gòu)?????????????????????????11.2PEDV基因組結(jié)構(gòu)????????????????????????11.3PED流行病學(xué)??????????????????????????41.4PED臨床癥狀??????????????????????????41.5PED病理變化??????????????????????????51.6PED致病機(jī)理???????

6、???????????????????51.7PED診斷方法??????????????????????????61.8研究目的與意義????????????????????????..7第二章豬流行性腹瀉病毒TaqMan熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立?????.92.1實(shí)驗(yàn)材料???????????????????????????..92.1.1病毒、質(zhì)粒與菌株?????????????????????.92.1.2主要實(shí)驗(yàn)器材???????????????????????.92.1.3主要試劑和藥品??????????????????????.

7、92.1.4主要培養(yǎng)基和緩沖液的配制?????????????????102.2實(shí)驗(yàn)方法???????????????????????????102.2.1熒光定量引物與探針的設(shè)計(jì)?????????????????102.2.2核酸的提取????????????????????????lO2.2.3標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的制備??????????????????????112.2.4熒光定量RT-PCR反應(yīng)體系及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立?????????132.2.5特異性實(shí)驗(yàn)????????????????????????142.2.6敏感性實(shí)驗(yàn)??????????????

8、??????????142.2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)????????????????????????1

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