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1、廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)2010，41(11)：1223—1225Gu∞gxiAsriculturalSciences豬瘟病毒TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立馬琳-，付薇1，何奇松z，徐賢坤1，易春華2，孫翔翔2，蔣家霞2，黃勝斌1，熊毅p(1廣西動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，南寧530001；2廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南寧530005)摘要：根據(jù)GenBank中5’端非編碼區(qū)的靶序歹Ⅱ設(shè)計(jì)了用=FTaqMan熒光定量PCR的1對(duì)引物及TaqMan探針，以豬瘟活疫苗病毒為模板，在常規(guī)PCR的基礎(chǔ)上優(yōu)化了TaqMan
2、熒光定量PCR反應(yīng)條件，建立了豬瘟病毒(csFv)TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法。其敏感性和特異性試驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的TaqMan熒光定量PcR檢測(cè)方法對(duì)CSFV具有很高的特異性，其檢測(cè)靈敏度可達(dá)5．03xl儼肛咖L。說明TaqMan熒光定量PCRj置用于CSFV的快速檢測(cè)。關(guān)鍵詞：豬瘟病毒；TaqMar度光定量PCR；TaqMan探針中圖分類號(hào)：S858．28文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1002—8161(2010)11-1223-03DevelopmentofTaqManfluorescentqua
3、ntitativePCRmethodfordetectingclassicalswinefevervirus(CSFV)MALinl，F(xiàn)UWeil，HEQi-son92，xuXian-kunl，YIChun-hua2，SUNXiang-xian92，JIANGJia-xia2，HUANGSheng-binl，XIONGYil’(1GuangxiCenterforAnimalDiseaseControlandPrevention，Nanning530001，China；2CollegeofAnimalSci
4、encesandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China)Abstract：ApairofpfimersandaTaqManprobeweredesignedaccordingtotheCSFV5’UTRsequencesofCSFVtakenfromGenBank，forperformingTaqManfluorescentquantitativePCR．RNAofclassicalswinefevervirus(CSFV)wasusedastem
5、plate，andthereactionconditionsofTaqManfluorescencePCRwereoptimizedbasedonconventionalPCR．TheTaqManfluorescentquantitativePCRmethodforCSFVwasdeveloped，whichshowedhishspecificityandhighsensitivitytoCSFV(detectionsensitivityof5．03×10≈斗∥斗【0，asrevealedbythesen
6、sitivityandspecificitytests．Therefore,thismethodcanbeusedforrapiddetectionofCSFV．Keywords：CSFV；TaqManfluorescentquantitativePCR；TaqManprobe豬瘟(ClassicalswiBefever。CSF)是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的毀滅性傳染病，在世界范圍內(nèi)廣泛流行，其發(fā)病率和死亡率均較高[·’2]。近年來，我國(guó)豬瘟的流行和發(fā)病特點(diǎn)發(fā)生了很大的變化，由過去的急性、高致病性、高死亡率
7、轉(zhuǎn)變?yōu)橐詼睾托?、非典型豬瘟和母豬持續(xù)性感染引起流產(chǎn)、死胎及新生仔豬發(fā)病、死亡為主。給獸醫(yī)臨床診斷帶來了困難№】。因此，當(dāng)前急需一種快速、特異、敏感的診斷方法用于該病的診斷和防制。目前．有關(guān)豬瘟診斷的方法主要包括：免疫熒光試驗(yàn)、細(xì)胞分離培養(yǎng)試驗(yàn)、動(dòng)物接種試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、血清學(xué)方法等【7圳。但這些方法均存在自身的不足之處．如免疫熒光試驗(yàn)未能完全排除豬瘟感染，還需進(jìn)行分離培養(yǎng)鑒定，病毒分離耗時(shí)較長(zhǎng)；ELISA和血清學(xué)方法只能檢測(cè)抗體，不適合早期診斷。且很難區(qū)分是由豬瘟病毒(Classica
8、lswinefevervirus。CSFV)還是由同屬的牛病毒性腹瀉病毒(Bovineviraldiarrheavirus，BVDV)產(chǎn)生的抗體；RT-PCR易漏檢和被污染?？梢?，傳統(tǒng)的檢測(cè)方法很難對(duì)CSFV進(jìn)行快速、靈敏地檢測(cè)。為此，本研究將TaqMan熒光定量PCR用于CSFV診斷，在常規(guī)PCR的基礎(chǔ)上優(yōu)化了TaqMan熒光定量PCR反應(yīng)條件．建立了敏感的CSFvTaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法，為實(shí)現(xiàn)快速、靈敏、準(zhǔn)確診
