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《豬源ttv taqman實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、豬源TTVTaqman實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用中國(guó)動(dòng)物傳染病2011,l9(2):13—19ChineseJouma1ofAnima1InfectiousDiseases?研究論文?豬源TTVTaqman實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用侯軍委,周艷君,王礞礞,李國(guó)新,于海,童光志(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所,上海200241)摘要:根據(jù)TTV1和TTV2的非編碼區(qū)(UTR)的保守序列分別設(shè)計(jì)并合成兩套特異性引物和Taqman探針,建立了鑒別TTVI和TTV2的Taqman實(shí)時(shí)熒光定量PC
2、R方法.通過(guò)常規(guī)PCR方法分別克隆TTV1和TTV2的非編碼區(qū)(UTR)的保守序列并將其連入pMD18-T載體,制備陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品,優(yōu)化反應(yīng)條件,以10倍系列稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),TTV1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的相關(guān)系數(shù)為O.984,TTV2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的相關(guān)系數(shù)為O.994.檢測(cè)結(jié)果顯示,兩種方法的靈敏度均可達(dá)l0copies/pL,除豬源TTV外,對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒,豬瘟病毒,豬2型圓環(huán)病毒,豬流感病毒檢測(cè)結(jié)果均為陰性.該方法重復(fù)性好,j比內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于3%.檢測(cè)采集自廣西和內(nèi)蒙古的44份病料,TTVl的
3、陽(yáng)性率為47.73%,TTV2陽(yáng)性率為70.45%,TTVl和TTV2混合感染的陽(yáng)性率為31.82%.豬源TTV檢測(cè)方法的建立為該病毒的流行病學(xué)調(diào)查和定量提供了有效的手段.關(guān)鍵詞:TTV1;TTV2;Taqman實(shí)時(shí)熒光定量PCR中圖分類(lèi)號(hào):$852.659.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號(hào):1674—6422(2ol1)02—0013一O7DEVELoPMENTANDAPPLICATIoNoFTAQMANREAL-TIMEFLUoRESCENCEQUANTlTATIVEPCRASSAYFORDETECTIoNoFP
4、oRCINEToRQUETENoVIRUSHOUJun—wei,ZHOUYan-jun,WANGMeng—meng,LIGuo—xin,YuHai,TONGGuang—zhi(ShanghaiVeterinaryResearchInstitute.CAAS,Shanghai200241.Chinn)Abstract:TwoTaqmanrea1.timefluorescencequantitativePCRswereestablishedusingtwosetsofprimersandprobesbasedon
5、theconserveduntranslatedregion(UTR)ofporcineTorqueTenovirusgenotype1and2(TTV1andTTV2).TheUTRsequencesofTTV1andTTV2wereclonedintothepMD18-Tvectorandaseriesofdilutedrecombinantplasmidswereusedtogeneratestandardcurves.ThequantitativePCRassayscoulddetectaslessa
6、s10copiesoftargetDNAofTTV1orTTV2.Theassayshowedgoodspecificityanddidnotcrossreactwithotherporcineviruses(PRRSCSFPCV2andsly)Thevariationcoefficientofintra—batchorinter—batchwerebothbelow3%whichindicatedgoodreproducibility.44clinicalsamplesofpigsfromNeimengan
7、dGuangxiweredetectedbythetwoquantitativePCRassays,andtheresultsshowedthat47.73%,70.45%and31.82%ofthesamplewerepositiveforTTVI,TTV2,andboth,respectively.Keywords:TTV1:TTV2:Taqmanreal—timefluorescencequantitativePCRTTV(Torquetenovirus,TTV)又稱(chēng)輸血傳播病毒(Transfusion
8、TransimittedVirus),該病毒收稿日期:基金項(xiàng)目:作者簡(jiǎn)介:通信作者:最初是由日本學(xué)者Nishizawa等采用代表性差異分析法從一名輸血后發(fā)生急性感染的非甲～戊型肝炎2011-04-22上海市科技人才計(jì)劃項(xiàng)目(09×D1405400);國(guó)家生豬現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)項(xiàng)目(MYCYTX一009)侯軍委,男,碩士研究生,預(yù)防獸醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)童光志,E—mail:gztong@shvri.ac.cn
