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《豬gapdh基因?qū)崟r(shí)熒光定量pcr方法的建立》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)2010年23卷4期1282SouthwestChinaJournalofAculturalSciencesVo1．23N0．4文章編號(hào)：1001—4829(2010)04—1282—04豬GAPDH基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR方法的建立韓建強(qiáng)，許文花，高斌(1．玉溪農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系，云南玉溪653106；2．云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南昆明650201：3．云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南昆明650201)摘要：根據(jù)GenBank上豬GAPDH基因的序列設(shè)計(jì)并合成一對(duì)引物，采用SYBRGreenI染
2、料建立了Real—timePCR方法。以陽(yáng)性重組質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品，建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行了融解曲線分析。結(jié)果表明，所建立的方法具有快速、高通量、線性范圍廣以及重復(fù)性強(qiáng)等特點(diǎn)。研究結(jié)果為GAPDH作為內(nèi)參基因用于豬相關(guān)基因定量表達(dá)分析奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：豬；GAPDH基因；Rea1．timePCR；內(nèi)參基因中圖分類號(hào)：$858．28文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADevelopmentofReal-timePCRAssayforSwineGAPDHGeneHANJian—qiang。XUWen—hua，GAOBin’(1．DepartmentofA
3、nimalScience，YuxiAculturalVocation·TechnicalCollege，YunnanYuxi653106，China；2．CollegeofAnimalSci—enceandTechnology，YunnanAculturalUniversity，YunnanKunming650201，China；3．CortegeofFoodScienceandTechnology，Yun·naIlAculturalUniversity，YunnanKunming650201，China)Abstract：
4、AccordingtotheswineGAPDHgenesequencesavailableinGenBank，apairofprimerswasdesignedforestablishingaSYBRGreen1quantitativereal-timePCRmethodforswineGAPDHgeneofswine．ToestablishthestandardCUI'Ye．theplasmidsservedasastand-ard．Theanaly8isofmeltingcurvewasalsocarriedout．T
5、heresultsshowedthatthereal—timePCRmethodestablishedinthestudyhadad—vantagesofrapid，high—throughput，widelinearrangeandsoedreproducibility．TheresultsofthisstudycouldprovidebasisforGAPDHusedasareferencegenetoanalyzetheswinegenequantitatively．Keywords：Swine；GAPDHgene；R
6、eal—timePCR；Referencegene實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-timePCR)是20世紀(jì)是在不同個(gè)體及組織細(xì)胞中均穩(wěn)定表達(dá)的持家基9O年代發(fā)展起來(lái)的一種準(zhǔn)確、快速的核酸定量分析因，常用的內(nèi)參基因主要包括B—actin、28SrRNA、技術(shù)?，是定量研究基因表達(dá)水平最為有用的方法18SrRNA、GAPDH、TBP和beta-2．microglobulin等。之一“J。它分為絕對(duì)定量和相對(duì)定量。絕對(duì)定量其中，GAPDH基因，即3一磷酸甘油醛脫氫酶基因PCR是用標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)檢測(cè)未知樣本的精確拷貝數(shù)；(Glycera
7、ldehyde一3一phosphatedehydrogenase)，為參與相對(duì)定量PCR是檢測(cè)未知樣本問(wèn)基因表達(dá)的差異。糖酵解的一種關(guān)鍵酶，是最為常用的內(nèi)參基因之一。在相對(duì)定量檢測(cè)中，為了比較不同樣本mRNA表達(dá)本研究即根據(jù)GenBank中豬GAPDH基因現(xiàn)有的相量水平，必須是不同樣品之間起始細(xì)胞數(shù)目相同、關(guān)序列，建立了基于SYBRGreenI染料技術(shù)的豬RNA提取效率相同、且目的基因的擴(kuò)增效率相同，GAPDHreal—timePCR方法，從而為GAPDH基因作才能保證結(jié)果的可比性。但實(shí)際上這些條件不可能為內(nèi)參基因，在利用r
8、ea1．timePCR對(duì)豬功能基因表同時(shí)得到滿足，因而需要通過(guò)選擇一個(gè)能在不同組達(dá)水平以及對(duì)病原基因的定量研究提供有用的方法織細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)的基因作為內(nèi)參，與目的基因同時(shí)學(xué)依據(jù)。檢測(cè)，以確定目的基因表達(dá)量。。。內(nèi)參基因往往1材料與方法收稿日期：2009—12—24作者簡(jiǎn)介：韓建強(qiáng)(1973一
