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《鴨黃病毒熒光定量PCR檢測方法的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第52卷第23期湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)V01．52No-232013年12月HubeiAculturalSciencesDee．，2013鴨黃病毒熒光定量PCR檢測方法的建立張蓉蓉，溫國元，羅青平，王紅琳，邵華斌(湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所／動物胚胎工程及分子育種湖北省重點實驗室，武漢430064)摘要：根據(jù)鴨黃病毒HBJL株NS5基因序列設(shè)計合成了引物和探針．通過對熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了TaqMan熒光定量PCR檢測鴨黃病毒的方法結(jié)果表明，該方法具有很好的特異性和重復(fù)性，熒光定量PCR敏感性是常規(guī)PCR的100倍左右同時對
2、30枚人工接種的鴨胚進行檢測并與常規(guī)PCR方法進行比較．檢測結(jié)果也表明熒光定量PCR法比常規(guī)PCR的敏感性高關(guān)鍵詞：鴨黃病毒：TaqMan探針：熒光定量PCR中圖分類號：$852．65．6文獻標識碼：A文章編號：0439—8114(2013)23—5811-03EstablishmentofFluorescenceQuantitativeRT-PCRAssayforDetectingDuckFlavivirusZHANGRong-rong，WENGuo-yuan，LUOQing-ping，WANGHong—lin，SHAOHua—b
3、in(InstituteofAnimalHusbandryandVeterinary，HubeiAcademyofAculturalScience／HubeiKeyLaboratoryofAnimalEmbryoEngineeringandMolecularBreeding，Wuhan430064，China)Abstract：ATaqMan—basedreal—timeRT—PCRassaywasdevelopedfordetectingduckflavivirus．Theprimersandprobesweredesigneda
4、ndsynthesizedbasedonthesequencesofNS5geneofduckflavivirusHBJL．Thereactionconditionswereoptimized．Theesta}：lishedreal—timePCRwerecomparedwithroutinePCR．Theresultsshowedthattheestablishedreal—timePCRassaywashighlyspecificandreproducible，100-foldmoresensitivethanthegel—ba
5、sedPCRondetectingtheduckfla-vivirusinfectedducks．30samplesofartificialinfectedduckembryosweredetectedbygel—basedPCRandreal—timePCRandtheresuhsshowedthatitssensitivitywashigherthanthatoftheroutineRT—PCR．Keywords：duckflavivirus；TaqManprobe；fluorescencequantitativePCR2010
6、年以來，中國上海、浙江、江蘇等地出現(xiàn)了1材料與方法蛋鴨產(chǎn)蛋量嚴重下降及蛋鴨死亡現(xiàn)象同年在湖北省一些養(yǎng)鴨場也出現(xiàn)不明原因引起的產(chǎn)蛋量下降1．1材料現(xiàn)象．臨床表現(xiàn)為產(chǎn)蛋量嚴重下降甚至停止．且蛋鴨黃病毒HBJL株為動物胚胎工程及分子育種鴨有一定的死亡率．剖檢病死鴨脾臟呈現(xiàn)明顯腫湖北省重點實驗室保存．該毒株用8～12日齡的鴨胚大，卵巢肉變，卯泡嚴重充血，出血?。增殖臨床診斷為鴨黃病毒感染引起的病毒病感染．1．2主要試劑該病的發(fā)生給養(yǎng)殖戶帶來了巨大的經(jīng)濟損失為了TaqDNA聚合酶、AMV反轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制提高鴨黃病毒檢測的準確性和高效性．
7、本研究擬建劑、DEPC、dNTPs、Mg+均購自寶生物工程(大連)有立一種能用于該病檢測的一步法熒光定量PCR方限公司：TransDNAMarker111購于北京全式金生法，為鴨黃病毒的流行病學(xué)、致病機理及診斷與防物科技有限公司：ViralRNAMiniKit(50)購自上治等方面提供技術(shù)平臺海華舜生物技術(shù)有限公司收稿日期：2013一l1一O5基金項目：國家公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201003012)；湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心項目(2011—620—001—0O3)；動物胚胎工程及分子育種湖北省重點實驗室開放課題(2010ZD15
8、0)作者簡介：~(1980一)，女，湖北荊州人，助理研究員，碩士，主要從事動物傳染病研究，(電話)027—87380193(電子信箱)zhangfqw@163．corn；通訊作者，邵華斌，研究員，(電子信箱)shhb1961@163．
