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《副溶血性弧菌論文：副溶血性弧菌 flae基因 原核表達(dá) 親和純化》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、副溶血性弧菌論文：副溶血性弧菌FlaE蛋白的原核表達(dá)、純化及其多克隆抗體制備【中文摘要】副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus,VP)是存在于近岸海洋環(huán)境的嗜鹽細(xì)菌,它常常因?yàn)槲廴竞Ｎ妒称范鹑祟惣毙晕改c炎,也可引起反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎,是一種重要的食源性致病菌。副溶血性弧菌具有極性鞭毛和周身鞭毛兩個鞭毛系統(tǒng)以適應(yīng)不同環(huán)境,其鞭毛蛋白有良好的免疫原性,可作為抗原制備抗體。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建原核表達(dá)極性鞭毛FlaE蛋白的重組大腸桿菌,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)并通過親和層析純化獲得蛋白,以其作為抗原制備多克隆抗體,為制備免疫磁珠,建立VP的快速富集和檢測奠定基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)主要得研究內(nèi)容和結(jié)果如下
2、：經(jīng)Genebank中查得Vibrioparahaemolyticus,BB22菌株極性鞭毛基因FlaE基因序列(登錄號為U12817.2),設(shè)計(jì)引物,利用PCR方法采用高保真酶從標(biāo)準(zhǔn)株ATCC17802基因組中擴(kuò)增出flaE基因片段,回收所得的擴(kuò)增產(chǎn)物與pMD19-Tvector連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a,利用氨芐青霉素、藍(lán)白斑篩選和菌落PCR初步確認(rèn)陽性重組子,隨后進(jìn)行測序鑒定。測序結(jié)果表明基因全長1122bp,與Genebank上VP.BB22flaE基因片段同源性達(dá)98%...【英文摘要】Vibrioparahaemolyticusisagram-negative,halophilic
3、bacteriumwhichiswidelydistributedovercoastalarea,andisalsoafood-bornepathogencausinghumanacutegastroenteritisandreactivearthritis.V.parahaemolyticuspossessesdualflagellarsystemsadaptedformovementunderdifferentcircumstances.Flagellarproteincanbeutilizedtoproduceantibodiesduetoitshighimmunogenicity.In
4、thiswork,recombinantbacteriaexpressingflaEgeneofV.parahaemolyticuswereconstructedsuccessfully,and...【關(guān)鍵詞】副溶血性弧菌flaE基因原核表達(dá)親和純化【英文關(guān)鍵詞】V.parahaemolyticusflaEgeneprokaryoticexpressionaffinitypurification【索購全文】聯(lián)系Q1：138113721Q2：139938848同時提供論文寫作一對一輔導(dǎo)和論文發(fā)表服務(wù).保過包發(fā)【目錄】副溶血性弧菌FlaE蛋白的原核表達(dá)、純化及其多克隆抗體制備摘要4-5Abstra
5、ct5縮寫詞表9-11第一章緒論11-181.副溶血性弧菌簡介11-161.1副溶血性弧菌的危害111.2副溶血性弧菌的鞭毛系統(tǒng)11-141.2.1鞭毛系統(tǒng)的基因組11-131.2.2極性鞭毛的結(jié)構(gòu)和組裝13-141.2.3副溶血性弧菌鞭毛的功能141.3.副溶血性弧菌的檢測方法14-161.3.1傳統(tǒng)檢測方法14-151.3.2PCR檢測法151.3.3基因芯片151.3.4免疫分析檢測15-162.本實(shí)驗(yàn)的目的和意義16-18第二章.副溶血性弧菌flaE基因的克隆及表達(dá)載體的構(gòu)建18-311材料與方法18-231.1材料18-191.1.1菌株與質(zhì)粒181.1.2主要實(shí)驗(yàn)材料181.1.3
6、主要試劑和培養(yǎng)基18-191.2方法19-231.2.1引物設(shè)計(jì)與合成191.2.2PCR擴(kuò)增191.2.3瓊脂糖凝膠電泳191.2.4PCR產(chǎn)物的回收與純化19-201.2.5目的片段和克隆載體的連接201.2.6連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a20-211.2.7克隆重組子的鑒定21-221.2.8表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建22-232結(jié)果與分析23-302.1副溶血性弧菌flaE基因的PCR擴(kuò)增23-252.2克隆載體的構(gòu)建及鑒定25-272.3目的片段的序列分析27-292.4表達(dá)載體的構(gòu)建29-304.本章小結(jié)30-31第三章副溶血性弧菌flaE基因的原核表達(dá)、蛋白純化及其多克隆抗體的制備31-44
7、1.材料與方法31-371.1材料31-321.1.1菌株與質(zhì)粒311.1.2主要實(shí)驗(yàn)材料311.1.3主要實(shí)驗(yàn)試劑31-321.1.4主要設(shè)備321.2方法32-371.2.1蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)32-331.2.2融合蛋白的純化33-341.2.3純化蛋白的含量測定34-351.2.4FlaE蛋白多克隆抗血清制備35-361.2.5ELISA檢測36-372結(jié)果與分析37-432.1大腸桿菌BL21
