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1、廣西北斗星動(dòng)物保健品有限公司操 作 標(biāo) 準(zhǔn)頁(yè)碼：4/4文件編碼：SOP-81021版本號(hào)：01 題目：鈷60輻照滅菌生物指標(biāo)菌（白色念珠菌）使用SOP1．目的：建立鈷60輻照滅菌生物指標(biāo)菌——白色念珠菌CMCC（F）98001的使用規(guī)程，保證正確使用，對(duì)鈷60輻照滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。2．適用范圍：適用于用鈷60輻照滅菌生物指標(biāo)菌——白色念珠菌CMCC（F）98001對(duì)鈷60輻照滅菌效果進(jìn)行的監(jiān)測(cè)。3．職責(zé)：鈷60輻照滅菌操作人員、QA人員、QC微生物檢驗(yàn)員對(duì)本標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施負(fù)責(zé)。4．方法：4.1白色念珠菌作為供試品無(wú)菌檢查的真菌對(duì)照菌。4.2培養(yǎng)基的制備4.2.1營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)
2、基胨10.0g，氯化鈉5.0g，牛肉浸出粉3.0g，水1000mL。取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2,分裝，滅菌。4.2.2營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基按上述4.2.1營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的處方及制法，加入14.0g瓊脂，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.2±0.2,分裝，滅菌。4.2.3硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)好氧菌、厭氧菌）酪胨（胰酶水解）15.0g，氯化鈉2.5g，葡萄糖5.0g，新配制的0.1%刃天青溶液1.0mL,硫乙醇酸鈉（或硫乙醇酸0.3mL）0.5g，L-胱氨酸0.5g，瓊脂0.75g，酵母浸出粉5.0g,水1000mL。廣
3、西北斗星動(dòng)物保健品有限公司操 作 標(biāo) 準(zhǔn)頁(yè)碼：4/4文件編碼：SOP-81021版本號(hào)：01 題目：鈷60輻照滅菌生物指標(biāo)菌（白色念珠菌）使用SOP除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.1±0.2。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/2。滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/5，否則，須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失（不超過(guò)20分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并應(yīng)防止被污染。硫乙醇酸鹽
4、流體培養(yǎng)基置30～35℃培養(yǎng)。4.2.3改良馬丁培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)真菌）胨5.0g，磷酸氫二鉀1.0g，酵母浸出粉身碎骨2.0g，硫酸鎂0.5g，葡萄糖20.0g，水1000mL。除葡萄糖外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH值約為6.8，煮沸，加入葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)節(jié)節(jié)pH值使滅菌后為6.4±0.2，分裝，滅菌。改良馬丁培養(yǎng)基置23～28℃培養(yǎng)。4.3菌液的制備接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，23～28℃培養(yǎng)24～48小時(shí)，培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1mL含菌數(shù)小于100cfu（菌落形成單位）的菌混懸液。4.4稀釋液、
5、沖洗液及其制備方法4.4.10.1%蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g,加水1000mL,微溫溶解，濾清，調(diào)節(jié)pH值至7.1±0.2,分裝，滅菌。4.4.2pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯化鈉4.30g、蛋白胨1.0g、加水1000mL,微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。4.6供試品的無(wú)菌檢查取本品4瓶，每瓶取10mL,混勻，取25mL轉(zhuǎn)移至250ml含1%聚山梨酯-80的0.1%無(wú)菌蛋白胨溶液中，充分振搖使其分散，加入β-內(nèi)酰胺酶溶液（每1廣西北斗星動(dòng)物保健品有限公司操 作 標(biāo) 準(zhǔn)頁(yè)碼：4/4文件編碼：SOP-81021版本號(hào)：01
6、題目：鈷60輻照滅菌生物指標(biāo)菌（白色念珠菌）使用SOPmg鹽酸頭孢噻呋加頭孢菌素酶不得少于1000單位），充分振搖，置37℃水浴中加熱1小時(shí)后，取出，按如下方法進(jìn)行檢查。取上述處理過(guò)的樣品10mL接種至各含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基的容器中。除另有規(guī)定外，每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10%，同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15mL,改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10mL。每種培養(yǎng)基接種的管數(shù)同供試品的檢驗(yàn)數(shù)量。4.5培養(yǎng)及觀察上述含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定的溫度培養(yǎng)14日，培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。如在加入供試品后
7、，或在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14日后，不能從外觀上判斷有無(wú)微生物生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線(xiàn)接種于斜面培養(yǎng)基上，細(xì)菌培養(yǎng)2日，真菌培養(yǎng)3日，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁或斜面是否有菌生長(zhǎng)；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。1．結(jié)果判斷若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)，方可判斷試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效：⑴無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用
