分子修飾狂犬病ERA疫苗株及表達(dá)埃博拉或馬爾堡病毒GP重組ERA疫苗株的研究

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1、分子修飾狂犬病ERAS苗株及表達(dá)埃博拉或馬爾堡病毒GP重組ERAS苗株的研究「分子修飾狂犬病毒ERAS苗株的研究狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabiesvirus,RABV)引起的一種人獸共患病,一旦出現(xiàn)神經(jīng)癥狀致死率幾乎達(dá)100%。全世界每年約60,000人死于該病,超過(guò)95%發(fā)生在非洲和亞洲。幾乎所有的人間狂犬病死亡病例均由犬咬傷或抓傷所傳播,而疫苗接種能有效防控狂犬病的肆虐。日益增多的流浪犬、散養(yǎng)家畜和野生動(dòng)物狂犬病的存在加大了狂犬病流行區(qū)人感染狂犬病的風(fēng)險(xiǎn),針對(duì)這些動(dòng)物進(jìn)行口服免疫比傳統(tǒng)的注射免疫更具有可行性。

2、因此,安全、有效的狂犬病口服疫苗的研發(fā)仍具有重要意義。本研究對(duì)G333位點(diǎn)突變成谷氨酸(E)的分子修飾狂犬病病毒ERAS苗株(rERAG333E)進(jìn)行生物學(xué)特性分析,并對(duì)其作為犬狂犬病口服疫苗的潛力進(jìn)行了評(píng)價(jià)。rERAG333EEBSR細(xì)胞上的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線與親本疫苗株ERAffi似，在感染后96h達(dá)到最高滴度(108.24FFU/mL),與ERA勺最高滴度(108.26FFU/mL)基本一致。rERAG333分別在乳鼠腦內(nèi)連續(xù)傳5代和NA細(xì)胞上連續(xù)傳20代，其G333汝變不發(fā)生回復(fù)突變，具有遺傳穩(wěn)定性。rERAG333的體外嗜

3、神經(jīng)指數(shù)(neurotropismindex,NI)為0,不具有體外嗜神經(jīng)性,而ERANI為0.4。將rERAG333卸ER的另?J按1X106和1X105FFU/30仙L/只的劑量顱內(nèi)接種感染成年BALB/c小鼠和乳鼠,rERAG333E感染組成年小鼠未見(jiàn)任何明顯的狂犬病癥狀,而rERA感染組成年小鼠14日內(nèi)全部死亡,表明G333汝變失去了ERAS苗株對(duì)成年小鼠的致病力;rERAG333E和rERA均能致死乳鼠，但rERAG333EM染組乳鼠的死亡進(jìn)程較rERA感染組推后了2天，表明G333汝變降低了ERAt對(duì)乳鼠的致病力。將

4、rERAG333Eg肌肉途徑接種BALB/c小鼠和比格犬，可誘導(dǎo)顯著的RABV中和抗體反應(yīng)，并對(duì)小鼠提供完全的攻毒保護(hù)，表明rERAG333E株對(duì)小鼠和犬均具有良好的免疫原性。為進(jìn)一步評(píng)估rERAG333的口服免疫效力，將rERAG333E分別按106、107、108FFU/100仙L/只的劑量經(jīng)口服途徑接種小鼠，均可誘導(dǎo)顯著、持續(xù)1年以上的RABS和抗體反應(yīng)，免疫后1年各免疫組小鼠均能獲得完全攻毒保護(hù)。同時(shí)，將rERAG333分別按108、109FFU/1,000L/只的劑量經(jīng)口服途徑1次接種或間隔55周2次接種比格犬。結(jié)果顯

5、示,1次接種組口服接種犬能誘導(dǎo)顯著的RABS和抗體反應(yīng)，免疫后156周109FFU和108FFU劑量組犬血清RABV中和抗體滴度平均值分別為1.24IU/mL和0.34IU/mL(2/4>0.5IU/mL);2次接種組初次免疫后55周,109和108FFU劑量組犬血清RABW和抗體滴度平均值分別為1.54IU/mL和2.71IU/mL,加強(qiáng)免疫后能誘導(dǎo)顯著的免疫記憶效應(yīng)，加強(qiáng)免疫后104周109和108FFUTIJ量組犬血清RABS和抗體滴度平均值分另I」為1.80IU/mL和1.61IU/mL;此外,rERAG333國(guó)服

6、免疫后4周109和108FFU劑量組犬唾液RABVI異性IgA轉(zhuǎn)陽(yáng)率分別為50%(5/10)和60%(6/10)。上述所有免疫犬均未出現(xiàn)任何狂犬病相關(guān)癥狀。本研究結(jié)果表明,分子修飾的ERAftrERAG333附犬具有良好的安全性，能誘導(dǎo)犬產(chǎn)生持續(xù)三年以上的中和抗體反應(yīng),以及特異性黏膜IgA反應(yīng),具有作為犬狂犬病口服疫苗的潛力。H:表達(dá)埃博拉或馬爾堡病毒GP?組ERAS苗株的研究埃博拉出血熱(Ebolahemorrhagicfever,EHF)和馬爾堡出血熱(Marburghemorrhagicfever,MHF)分別由埃博拉病毒

7、(Ebolavirus,EBOV)和馬爾堡病毒(Marburgvirus,MBGV)引起,均為烈性人畜共患病，以發(fā)熱、急性出血、高發(fā)病率和高死亡率為特征。EH林口MHF勻能在人間傳播，并能感染蝙蝠等多種野生動(dòng)物和犬、豬等強(qiáng)流動(dòng)性家畜，該類病一旦發(fā)生將造成嚴(yán)重的公共安全問(wèn)題。到目前為止仍無(wú)官方許可的人用EHFffiMH隴苗投入使用,并且通過(guò)注射途徑免疫野生動(dòng)物和流動(dòng)性強(qiáng)的家養(yǎng)動(dòng)物以清除傳染源和切斷傳播途徑顯得極其困難。因此，研制有效的EHF或MH隊(duì)用滅活疫苗和動(dòng)物口服疫苗顯得尤為緊迫和重要。本研究以狂犬病候選口服疫苗株rERAG3

8、33囪活病毒載體,分別構(gòu)建了表達(dá)扎伊爾EBOV(ZEBOV)蘇丹EBOV(SEBOV)MBGV勺里子生型GP(wt-G)或密碼子優(yōu)化GP(co-G)的重組病毒rERAG333E/ZGFTERAG333E/ZGPGCDERAG333E/SGPrERAG333E/S