DB22T 1987-2013 飼料中己烯雌酚的測定液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法

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1、ICS65.120B46備案號：40177-2014DB22吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)本標(biāo)準(zhǔn)僅供內(nèi)部使用不得翻印DB22/T1987—2013飼料中己烯雌酚的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)僅供內(nèi)部使用不得翻印Determinationofdiethylstilbestrolinfeeds—LC-MS/MSmethod2013-12-18發(fā)布2013-12-31實(shí)施吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布本標(biāo)準(zhǔn)僅供內(nèi)部使用不得翻印本標(biāo)準(zhǔn)僅供內(nèi)部使用不得翻印DB22/T1987—2013本標(biāo)準(zhǔn)僅供內(nèi)部使用不得翻印前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009和GB/T20001.4—2001給出的規(guī)則起草。本標(biāo)

2、準(zhǔn)由吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院、順德出入境檢驗(yàn)檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：劉斌、邵秋榮、史艷宇、王宇、王瀟、王家旭、石金娥、李瀅倩、李媛媛。本標(biāo)準(zhǔn)僅供內(nèi)部使用不得翻印I本標(biāo)準(zhǔn)僅供內(nèi)部使用不得翻印本標(biāo)準(zhǔn)僅供內(nèi)部使用不得翻印DB22/T1987—2013本標(biāo)準(zhǔn)僅供內(nèi)部使用不得翻印料飼料中己烯雌酚的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中己烯雌酚含量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中己烯雌酚含量的測定。本方法檢出限為0.01mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所

3、注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備3原理本標(biāo)準(zhǔn)僅供內(nèi)部使用不得翻印試料用乙腈提取，經(jīng)陰離子固相萃取柱凈化、濃縮后，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）測定，外標(biāo)法定量。4試劑與材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水符合GB/T6682規(guī)定一級水的標(biāo)準(zhǔn)。4.1氫氧化鈉（NaOH）。4.2甲醇(CH3OH)。4.3甲酸(HCOOH)。4.4乙腈(CH3CN)：色譜純。4.5氨水(NH4OH)：濃度25%～28%。4.6氫氧化

4、鈉溶液（0.01mol/L）：稱取0.4g氫氧化鈉（4.1），用水定容至1L。4.770%甲醇溶液：量取70mL甲醇（4.2），用水定容至100mL。4.8氨水溶液：氨水-水（1+19，體積比）。4.9甲酸甲醇溶液：甲酸-甲醇（1+19，體積比）。4.10己烯雌酚（diethylstilbestrol）標(biāo)準(zhǔn)品：C18H20O2，CAS：56-53-1，純度≥99.0%。4.11標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.0mg/mL）：準(zhǔn)確稱取0.0100g己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇定容至10.0mL。4℃條件下避光保存，可使用1個(gè)月。4.12標(biāo)準(zhǔn)工作液：取標(biāo)準(zhǔn)儲備液（4.11）用70%甲醇溶液（4.7）

5、稀釋，配制成濃度依次為0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L的己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)需要用2.0mL適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液溶解空白樣品濃縮殘?jiān)?，配制成相?yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。4.13弱陰離子交換固相萃取柱：60mg/3mL，或相當(dāng)者。1DB22/T1987—20134.14濾膜：0.22μm，有機(jī)相。5儀器和設(shè)備本標(biāo)準(zhǔn)僅供內(nèi)部使用不得翻印5.1液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧（ESI）離子源。5.2離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥8000r/min。5.3天平：感量0.0001g。5.4超聲波清洗器：40kHz。5.5固相萃取裝置。5

6、.6氮吹儀。6分析步驟6.1試樣制備選取有代表性飼料樣品至少500g，按GB/T20195制備樣品。6.2提取稱取5g粉碎試樣（精確到0.001g）于50mL離心管中，加入40mL乙腈（4.4），混勻，超聲提取15min，5000r/min離心10本標(biāo)準(zhǔn)僅供內(nèi)部使用不得翻印min，上清液轉(zhuǎn)移至另一50mL離心管中；殘?jiān)屑尤?0mL乙腈再次提取，合并兩次提取溶液，40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加5mL氫氧化鈉溶液（4.6）溶解殘?jiān)?000r/min離心5min，取上清液，待凈化。6.3凈化將陰離子固相萃取柱連接于真空固相萃取裝置下，先用2mL甲醇（4.2）、2mL水將柱子活化，

7、將6.2的樣品上清液上柱，流速為1mL/min，依次用1mL氨水溶液(4.8)、0.5mL甲醇以3mL/min的流速淋洗，用4mL甲酸甲醇溶液(4.9)洗脫，流速為1mL/min。收集洗脫液，在40℃下經(jīng)氮?dú)獯蹈珊?，?mL70%甲醇溶液（4.7）溶解殘?jiān)?，過0.22μm濾膜（4.14），供HPLC-MS/MS測定。6.4測定6.4.1液相色譜參考條件：a）色譜柱：C18柱,5μm，150mm×2.1mm，或相當(dāng)者；b）流動(dòng)相：V（水）+V（乙腈）=43+57；c）流速：0.3mL/min；d）進(jìn)樣量：5μL；e）